[发明专利]重组美洲大蠊过敏原蛋白的表达方法

摘要

本发明涉及生物技术领域，公开了一种重组美洲大蠊过敏原蛋白的表达方法。本发明的目的是针对蟑螂过敏原浸提液进行免疫耐受治疗的不足，从常见的蟑螂种属美洲大蠊组织中提取总RNA，扩增出美洲大蠊主要过敏原基因Pera1.0101、Per a 1.0102、Per a 1.0104、Per a 7.01的编码基因，通过基因工程手段，在大肠杆菌中低温诱导表达重组蟑螂过敏原蛋白，可用于蟑螂引起的过敏反应疾病的诊断和治疗，避免了天然提取物的非单一性及标准化难的障碍。

主权项

1、一种重组美洲大蠊过敏原蛋白Per a 1.0101、Per a 1.0102、Per a 1.0104或Per a 7.01的表达方法，其特征在于包括如下步骤：(1)从美洲大蠊组织中提取总RNA；(2)合成引物：pET-Per a 1.0101-P1 CATATGGAGTTCCAGAGCATTATCTCAACpET-Per a 1.0101-P2 AAGCTTTCAGGGCAGGCCGAACAAGpET-Per a 1.0102-P1 CATATGAGCATTATCTCAACTCTAAATGCCATGCCpET-Per a 1.0102-P2 AAGCTTTCAGGGCAGGCCGAACAAGCTGCpET-Per a 1.0104-P1 CATATGGTTGGTGTCGATGGTCTCATAGACpET-Per a 1.0104-P2 AAGCTTTCAGGGCAGGCCGAACCAGpET-Per a 7.01-P1 GAATTCGACGCGATCAAGAAGAAGATGpET-Per a 7.01-P2 GCGGCCGCGTTGCCAATAAGTTCGGTGAAAG(3)以总RNA为模板，通过RT-PCR获得美洲大蠊过敏原蛋白编码基因片段；(4)将编码基因克隆入原核表达载体中，转化宿主菌，培养所得重组工程菌，然后诱导其表达目的蛋白；(5)采用亲和层析方法对目的蛋白进行纯化，从而获得重组美洲大蠊过敏原蛋白Per a 1.0101、Per a 1.0102、Per a 1.0104或Per a 7.01。