[发明专利]从电泳后的聚丙烯酰胺胶中回收DNA的方法

摘要

本发明涉及一种从电泳后的聚丙烯酰胺胶中回收DNA的方法，它依次包括以下步骤：用dH₂O清洗胶条样品、以凝胶研磨棒研磨凝胶至成粉状、凝胶浸泡、凝胶去除、DNA连接、DNA吸附、DNA洗涤、DNA洗脱等。本发明的优点是①DNA回收量大，纯度高。②操作时间短，操作简单。③不需要特殊设备，成本低廉。④可以制成试剂盒。⑤也可用于琼脂糖凝胶的DNA回收。

主权项

1.一种从电泳后的聚丙烯酰胺胶中回收DNA的方法，依次包括以下步骤：1)样品清洗：电泳后，在紫外灯下切下含DNA片段的胶条，胶条长0.6-1cm、宽1-3mm、厚0.75-1mm，放入1.5ml离心管中，以移液枪加入100-200μl ddH2O清洗胶条三次，完毕后，吸出清洗液；2)凝胶研磨：以凝胶研磨棒研磨凝胶至成粉状；3)凝胶浸泡：取150-200μl以10-30mM三羟基甲基氨基甲烷、10-20mM乙二胺四乙酸组成的pH为8.0的TE缓冲液反复冲洗研磨棒，直至研磨棒不带有凝胶；70℃水浴1.5-2.5hr，期间振荡数次；4)凝胶去除：8000-10000转/分，离心2min吸取上清；5)DNA连接：上清移入一支新的离心管，加入450-600μl成份为6-10M异硫腈酸胍、100-300mM三羟基甲基氨基甲烷、pH值为5-6的DNA连接液，混合2min；6)DNA吸附：将DNA硅胶吸附柱放置在离心管中，将混合液移入硅胶吸附柱，3000-6000转/分离心0.5min，弃离心管中液体；7)DNA洗涤：DNA硅胶吸附柱中加入成份为10-20mM pH8.0的三羟基甲基氨基甲烷(Tris)，与无水乙醇1∶2-1∶4混合的DNA洗涤液500-800μl，以3000-6000转/分，离心0.5min，弃离心管中液体；重复操作1-2次；将DNA硅胶吸附柱重新放入离心管中，空管8000-9000转/分离心1min.。8)DNA洗脱：将DNA硅胶吸附柱移入一支新的离心管中，DNA硅胶吸附柱底部中央加入30-60μl预热至65℃的DNA洗脱液，成份为5-20mM pH8.0的三羟基甲基氨基甲烷(Tris)或ddH2O；65℃水浴2min，6000-9000转/分离心1min；重新将离心收集的液体加入到DNA硅胶吸附柱底部中央；65℃水浴1min，6000-9000转/分离心1min；离心管中收集液体即为从聚丙烯凝胶中回收的DNA溶液，-20℃保存。