[发明专利]从心肌中提取纯化高铁肌红蛋白的方法

摘要

本发明涉及一种蛋白的提取纯化工艺，具体是从心肌中提取纯化高铁肌红蛋白的方法。具体的方法是：将新鲜动物心肌经前处理，萃取得到组织蛋白粗提物；粗提物再经硫酸铵盐析后，通过截留分子量为14000的透析处理得透析样品；将透析样品经DEAE－Sepharose Fast Flow阴离子交换层析，收集红褐色洗脱液；收集的洗脱液再经Sephacryl S－200HR凝胶过滤层析，收集洗脱峰相对应的红褐色洗脱液，即得到纯化的高铁肌红蛋白。本发明方法具有产品纯度高，工艺简单、成本低等优点，既可填补我国该生物试剂制备的空白，又具有较高的经济价值。

主权项

1、一种从心肌中提取纯化高铁肌红蛋白的方法，包括以下步骤：1)将新鲜动物心肌剁碎，加入冰冷的肌红蛋白萃取缓冲液，经匀浆、离心、过滤后得粗提液；所说的肌红蛋白萃取缓冲液是10mM Tris-HCl，1mM EDTA，pH8.0；2)粗提液经70％-100％硫酸铵盐析，得到的沉淀用平衡缓冲液A重悬，再加入过量的K3Fe(CN)6，离心后取上清液对平衡缓冲液A透析，透析膜的截留分子量为14000，得透析液；所说的平衡缓冲液A是10mM Tris-HCl，1mM EDTA，10mMNaCl，pH8.5；3)将透析液上样到DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子交换层析柱，用平衡缓冲液A洗脱，收集洗脱峰对应的红褐色洗液；4)将收集的洗脱液泠冻干燥浓缩后，上样到Sephacryl S-200HR凝胶过滤层析柱，用平衡缓冲液B洗脱，收集洗脱峰相对应的红褐色洗脱液，即得到纯化的高铁肌红蛋白；所说的平衡缓冲液B是100mM Tris-HCl，100mM NaCl，pH7.5。