[发明专利]一种四环素族抗生素酶联免疫检测试剂盒

摘要

一种四环素族抗生素酶联免疫检测试剂盒，涉及酶免疫分析技术。本发明采用酶免疫吸附、蛋白质偶联和生物化学制备技术制备了本检测试剂盒。其关键技术是将四环素族经改造后以琥珀酸酐为桥与蛋白BSA偶联制备包被抗原，四环素族以戊二醛为桥与蛋白BSA偶联合成免疫抗原。再用酶免疫吸附间接竞争法检测四环素族。试剂盒具有简便、快速、准确检测动物性食品中四环素族抗生素的优点，其检测范围在1950ng/g－1.90ng/g之间，检测时间仅需4小时。本方法平均回收率80％－120％，批内误差小于8％，批间误差小于10％。适用于奶制品、蜂产品、水产品、肉类产品中四环素族抗生素的检测。

主权项

1.一种四环素族抗生素酶联免疫检测试剂盒，其特征是由标准品溶液试剂瓶(1)、酶标抗抗体溶液试剂瓶(2)、抗体溶液试剂瓶(3)、底物溶液试剂瓶(4)、显色剂溶液试剂瓶(5)、终止液试剂瓶(6)、洗涤液试剂瓶(7)、酶标板(8)及酶标板支架(9)、盒体(10)所组成，试剂瓶(1)、(2)、(3)、(4)、(5)、(6)、(7)和酶标板(8)及酶标板支架(9)均安装在盒体(10)内，包被酶标板的包被抗原，制备抗体的人工免疫抗原均由四环素族与BSA蛋白偶合人工合成；a)标准品溶液配制：准确称取标准盐酸四环素族1mg，精确到0.00002g，配成0.5mg/mL标准品溶液母液，灌装入试剂瓶(1)，使用时，用磷酸盐缓冲液稀释成所需的浓度10-1000ng/mL的系列标准品溶液；b)酶标抗抗体溶液配制：酶标抗抗体为辣根过氧化物酶-羊抗兔IgG原液，灌装入试剂瓶(2)，使用时用洗涤液按1∶4000配制成工作浓度；c)抗体溶液配制：用人工免疫抗原免疫动物制备所得到的多克隆或单克隆抗体，将所得的四环素族抗体用磷酸盐缓冲液稀释成工作浓度1∶4000，灌装入试剂瓶(3)；d)底物溶液配制：使用0.1mol/L pH5.0的醋酸钠-柠檬酸缓冲液，再配制质量浓度0.3％H2O2作贮备液，每1ml缓冲液中加入14μL贮备液，灌装入试剂瓶(4)；e)显色剂溶液配制：用丙酮配制成10mg/mL的四甲基联苯胺溶液，用0.1mol/LpH5.0的醋酸钠—柠檬酸缓冲液配制成0.2mg/mL的四甲基联苯胺溶液，灌装入试剂瓶(5)；f)终止液配制：2mol/L H2SO4溶液，灌装入试剂瓶(6)；g)洗涤液配制：含0.05％吐温20的磷酸盐缓冲液，0.01mol/L pH7.5磷酸盐缓冲液中含0.15mol/L的氯化钠，灌装入试剂瓶(7)；h)酶标板的包被：取四环素族人工包被抗原150-200μL，加入反应板孔中，4℃冰箱中过夜，倒出孔内液体，用洗涤液(7)洗涤3-5次，将酶标板倒置在吸水纸上拍打，吸干在已包被抗原的酶标板小孔中加200μL 1％BSA PBS封闭液，37℃恒温培育1h，用洗涤液(7)洗涤，重复3次，用吸水纸吸干，封装。