[发明专利]从红茶菌中分离纯化酿酒酵母菌的方法

摘要

本发明涉及从普通混杂的红茶菌液中纯化获得酿酒酵母菌菌株的方法。所要解决的问题是：提供一种分离纯化红茶菌中重要菌种—酿酒酵母菌的工艺方法。特点是：包括下述步骤，取家庭或市售的红茶菌菌液进行纯化分离；按照《微生物分类学》一书中的方法对分离获得的多个纯的酵母菌菌株进行菌种鉴定；用斜面菌种接种静止培养红茶菌的方法以筛选酿酒酵母菌菌株；本发明采用微生物学技术从传统的红茶菌饮料中分离纯化出红茶菌的主要酿酒酵母菌菌株，以利于用纯菌株培养出具有醇、酸、甜、香独特风格的红茶菌。这种工艺具有无杂菌污染、菌种易保藏、产品质量稳定、易于工业化生产和产品商业化的特点。

主权项

1、从红茶菌中分离纯化酿酒酵母菌的方法，其特征在于：(1)、从红茶菌中分离纯化酿酒酵母菌A、取家庭或市售的红茶菌菌液，在无菌条件下，用取样器从菌膜下吸取0.1mL的菌液，采用0.85％生理盐水进行10倍、100倍、1000倍的梯度稀释，得三份稀释液；B、在超净工作台上，取融化后降温至约50℃的葡萄糖酵母膏(GYC)固体培养基倒平板，在平板中注入约20mL的培养基，在培养基中加入0.1～100mg/L浓度的抑制细菌的抗生素，待培养基凝固后，取上述三份稀释液0.05mL～0.2mL分别加入三个平板上，用三角刮铲将菌液均匀涂布于平板表面；C、将上述制备好的平板置于25℃～35℃的培养箱中培养3～7天；D、用接种环挑取经纯化的过各种典型的酵母菌菌株的菌落至另一新配置的葡萄糖酵母膏(GYC)固体培养基平板划线，将平板置于25℃～35℃的培养箱中培养3～7天；E、持续D步骤的操作至少2次，直至菌落完全纯化；得到20株以上纯的酵母菌菌株；(2)、按照《微生物分类学》的方法对分离获得的多个纯的酵母菌菌株进行菌种鉴定，经鉴定获得管囊酵母菌、酿酒酵母菌、德氏酵母菌、毕赤氏酵母菌共4种酵母菌；(3)、用斜面菌种接种静止培养红茶菌的方法以筛选酿酒酵母菌菌株将鉴定为管囊酵母菌、酿酒酵母菌、德氏酵母菌、毕赤氏酵母菌的4株酿酒酵母菌菌株与木醋酸菌、巴氏醋酸菌、液化醋酸菌、弱氧化醋酸菌共4株醋酸菌菌株分别进行两两组合接种试验，即一种酿酒酵母菌加一种醋酸菌的组合接种试验，具体操作步骤如下：A、红茶菌糖茶液的配制，取原料茶叶3～10g，糖30～100g，水1000mL，用沸水冲泡茶叶和糖，保持微沸1～10min，静置使茶叶沉淀，取上清液，分装至试管、150mL或250mL三角瓶，108℃～121℃灭菌处理10～25min；B、按两两组合用接种环从上述纯化的4株酵母菌菌株和4醋酸菌菌株的纯培养中挑取一环混合分别接进红茶菌糖茶液中，20℃～35℃静止培养6～15天；即管囊酵母菌分别与木醋酸菌、巴氏醋酸菌、液化醋酸菌、弱氧化醋酸菌菌株混合接种；即酿酒酵母菌分别与木醋酸菌、巴氏醋酸菌、液化醋酸菌、弱氧化醋酸菌混合接种；即德氏酵母菌分别与木醋酸菌、巴氏醋酸菌、液化醋酸菌、弱氧化醋酸菌混合接种；即毕赤氏酵母分别与木醋酸菌、巴氏醋酸菌、液化醋酸菌、弱氧化醋酸菌混合接种；结果是，酿酒酵母菌分别与木醋酸菌、巴氏醋酸菌、液化醋酸菌、弱氧化醋酸菌混合接种后均可以形成典型的带有胶膜的红茶菌液。