[发明专利]一种细胞核移植的方法

摘要

本发明公开了一种简便、有效而且实用的显微操作细胞核移植的方法。该方法主要为利用事先吸入生物物质的注射针挤压卵母细胞使其在注射针和持卵针之间形成透明带皱褶，然后将注射针刺进并穿透透明带皱褶进入持卵针的开口中，一边将注射针拔回至卵周隙中一边缓慢增加持卵针内的负压，将极体与目标核质吸进持卵针，再用持卵针调整卵母细胞的位置，使其中心与注射针针尖在同一水平线上，重新固定卵母细胞，最后将注射针内的生物物质直接注入细胞质或卵周隙中。该方法可以在不需要特殊设备的情况下一次快速完成显微去核和注核过程，而且对卵的损伤较小，便于在动物克隆和转基因等细胞工程领域广泛推广应用。

主权项

1.一种细胞核移植的方法，包含如下步骤：(1)在直径为8±4μm的注射针中事先吸入生物物质；(2)先用直径15～30μm的持卵针以9点钟的方向固定住卵母细胞；(3)将另一侧的注射针针尖沿持卵针相对方向移至卵母细胞的正下方；(4)将注射针上移，挤压卵母细胞使其在注射针和持卵针之间形成透明带皱褶，至注射针针尖与持卵针开口位置对齐；(5)注射针刺进并穿透透明带皱褶，进入持卵针的开口中；(6)降低持卵针内的负压，使其正好能支持卵母细胞止，一边将注射针拔回至卵周隙中，一边缓慢增加持卵针内的负压，直到极体与目标核质被吸进持卵针内止；(7)降低持卵针内的负压至持卵针与卵母细胞脱离，以上述在卵周隙中的注射针为支点，用持卵针重新调整卵母细胞的位置，使其中心与注射针针尖在同一水平线上，然后增加持卵针内的负压，重新固定卵母细胞；(8)将上述事先吸到注射针中的生物物质注入到去核的卵母细胞质中或卵周隙中。