[发明专利]乙型肝炎病毒耐药基因突变的荧光定量PCR检测方法有效
| 申请号： | 200610044681.7 | 申请日： | 2006-06-12 |
| 公开（公告）号： | CN1896278A | 公开（公告）日： | 2007-01-17 |
| 发明（设计）人： | 鲁艳芹;韩金祥;戚鹏;阚洪晶 | 申请（专利权）人： | 山东省医药生物技术研究中心 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12Q1/70;G01N21/64 |
| 代理公司： | 济南金迪知识产权代理有限公司 | 代理人： | 鲍光明 |
| 地址： | 250062山*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种乙型肝炎病毒拉米夫定耐药基因突变的实时荧光定量PCR检测方法。乙型肝炎病毒拉米夫定耐药相关突变位于DNA多聚酶基因的rtL180M、rtM204V/I突变。该方法利用PCR反应中引物在3’末端存在错配时不能正确延伸的特点，将突变位点设计在荧光定量PCR引物的3’末端，采用合适的引物浓度，Touch－down PCR反应程序，同时结合嵌合有SyBrGreen I染料的PCR产物的熔点曲线。根据荧光定量PCR信号和熔点曲线，即可以判断拉米夫定位点是否发生突变。该发明能准确快速地检测乙肝病毒临床标本中DNA突变，同时亦适用于其它基因的突变检测。 | ||
| 搜索关键词： | 乙型肝炎 病毒 耐药 基因突变 荧光 定量 pcr 检测 方法 | ||
【主权项】：
1.一种乙型肝炎病毒拉米夫定耐药基因突变的实时荧光定量PCR检测方法，其特征在于，根据乙型肝炎病毒拉米夫定耐药相关突变rtL180M、rtM204V/I，将突变位点分别设计在下游引物的3’端，上游引物为多聚酶区的一段保守的核苷酸序列，利用优化的荧光定量PCR反应程序，通过荧光定量PCR反应，对从血清样本提取的乙型肝炎病毒DNA进行PCR扩增，根据CT值和熔点曲线来检测是否有突变发生。
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