[发明专利]一种检测土壤中羟胺还原酶活性的分析方法

摘要

本发明涉及一种检测土壤中羟胺还原酶活性的分析方法，1)称取0.5－1g土壤风干样品n份于试管中，向其中n－1只试管中加入盐酸羟胺，另1只试管中加入蒸馏水作样本对照；调pH为7－8.5，向试管中加入葡萄糖溶液，用蒸馏水补充至5－10ml，排除试管中的空气，塞上橡胶塞，摇匀后恒温培养；2)用蒸馏水补充至50－100ml；3)加入铝钾矾饱和溶液；振荡、过滤；4)取滤液加缓冲液、显色剂，在510nm下测定吸光值为A；5)计算样品中羟胺含量。本发明的优点主要有：1)简化了操作步骤，减少了厌氧培养过程的复杂性和不确定性；2)显色灵敏度更高，将分析精确度提高了一个数量级；3)分析结果稳定可靠，重现性好。

主权项

1.一种检测土壤中羟胺还原酶活性的分析方法，其特征在于：1)分别称取0.5-1g土壤风干样品n份于试管中，n≥2，向其中n-1只试管中加入0.5-2ml 0.5％-1.0％的盐酸羟胺，另1只试管中加入等量的蒸馏水作为样本对照；用弱碱调解pH至7-8.5，然后向试管中分别加入1-2ml0.5％-1％的葡萄糖溶液作为氢的供体，再用蒸馏水补充至5-10ml，用惰性气流排除试管中的空气，塞上不透气的橡胶塞，摇匀后置于29.5-30.5℃恒温箱中培养4.9-5.1h；同时作试剂不放土壤风干样品的空白对照；2)培养结束后，用10-40ml蒸馏水将试管内的土水混合物完全转移至三角瓶中，再用蒸馏水补充至50-100ml；3)加入铝钾矾饱和溶液1-2ml；振荡、过滤； 4)取滤液1ml于50ml容量瓶中，加缓冲液、相对盐酸羟胺过量的显色剂，然后用蒸馏水定容至刻度，在510nm下用分光光度计比色测定吸光值为A；5)在510nm下比色测定二组或二组以上已知浓度的羟胺溶液的吸光值A’，以羟胺溶液的浓度和测定的吸光值A’制作标准曲线，得到斜率b；6)根据吸光值A和斜率b，计算所测定溶液中羟胺的浓度S，S＝A*b；7)计算样品中羟胺浓度；8)计算羟胺还原酶活性，计算公式为：[(S1-(S2-S3))*50*V/1000]/W，单位mgNH2OH·g-1soil·5h-1；式中，S1为试剂空白中的NH2OH含量(mg·L-1 或μg·ml-1)，S2为样品中的NH2OH含量(mg·L-1或μg·ml-1)，S3为样品对照中的NH2OH含量(mg·L-1或μg·ml-1)，50为定容后的溶液体积，V为步骤2中补充蒸馏水后的溶液体积，1000为单位转换系数，W为称土样重。