[发明专利]用微细胞团块再生法脱除丹参病毒的方法

摘要

本发明属于植物的提纯复壮和繁育，特别是指一种用微细胞团块再生法脱除丹参病毒的方法。包括愈伤组织诱导、愈伤组织调控、细胞悬浮培养、愈伤诱导再生植株、再生植株的病毒检测(酶链免疫吸附法)获得脱除CMV病毒的丹参植株等工艺步骤。本发明避开了常规热处理钝化病毒的过程，直接采用体细胞诱导脱分化成为分裂细胞(愈伤)，分生细胞经状态调控直接诱导再生，形成植株，脱除病毒。因此，这种方法克服了因常规“热处理+茎尖培养”脱毒方法造成的热处理植株干枯、死亡的问题。特别适用于丹参脱病毒，也适用于多数植物脱病毒。

主权项

1、用微细胞团块再生法脱除丹参病毒的方法，其特征在于包括如下工艺步骤：(1)愈伤组织诱导：将丹参外植体洗净消毒后，接种在愈伤诱导培养基上在黑暗条件下进行诱导愈伤，得到诱导后的愈伤组织；(2)愈伤组织调控：将诱导出的愈伤组织从母体上分离出来后，进行继代培养，使愈伤组织呈松散、颗粒状；(3)细胞悬浮培养：将步骤(2)中获得的松散、颗粒状愈伤组织1～2克，压碎后接种于培养基上培养，过滤获得微小细胞团块；(4)愈伤诱导再生植株：将步骤(3)中获得的微小细胞团块，转移到培养基上培养，诱导再生植株；(5)再生植株的病毒检测：用酶链免疫吸附法检测，获得脱除了病毒的丹参植株。