[发明专利]一种具有厌氧氨氧化活性的浮霉状菌的分离、鉴定方法

摘要

本发明公开了一种具有厌氧氨氧化活性的浮霉状菌的分离、鉴定方法，即先分离浮霉状菌，再以厌氧条件下同时转化氨和亚硝酸盐的能力作为判据，确认该菌为厌氧氨氧化菌，最后鉴定该菌的分类地位。它采用了一种适合浮霉状菌生长的培养基，在基本无机盐培养基中添加微量酵母膏或葡萄糖。同时采用一种新的厌氧氨氧化菌鉴定程序。即先纯化菌株，确认厌氧氨氧化活性，再鉴定菌种。本发明的优点是：1)可以获得厌氧氨氧化菌的纯培养物，为微生物学研究和工业化应用提供菌种；2)易探明被分离菌株的生理生化特性，便于菌种保藏和大量扩增；3)分离、鉴定程序简单，结果可信。

主权项

1、一种具有厌氧氨氧化活性的浮霉状菌的分离方法，其特征在于，方法的步骤如下：1)选取同时具有氨和硝酸盐或氨和亚硝酸盐的自然生境和人工生境样品作为具有厌氧氨氧化活性的浮霉状菌的分离源，自然生境样品主要是渍水土壤、沼泽地污泥、湖泊底泥、海洋沉积物，人工生境样品主要是城市污水处理厂曝气池污泥、城市污水处理厂厌氧消化池污泥、各种废水生物脱氮处理系统中的活性污泥；2)以含有0.1mg/L～1mg/L酵母膏或葡萄糖的基本无机盐液体培养基作为富集基质，采用连续培养或分批培养的方式，培育厌氧氨氧化生物膜、絮体或颗粒污泥；3)取厌氧氨氧化生物膜、絮体或颗粒污泥，用超声波破碎，制成初级菌悬液，再逐级稀释制成系列菌悬液；4)将系列菌悬液混合于融化的固体培养基中，在28-30℃下进行厌氧滚管法培养，用毛细管将厌氧滚管上长出的单菌落挑入液体培养基中，在28-30℃下厌氧培养，培养后，再采用厌氧滚管法分离单菌落，如此重复数次，当在显微镜下观察到的细菌细胞形态一致时，即认为目标菌株已被纯化。