[发明专利]改良的细胞内活性氧检测方法无效
| 申请号： | 200610049809.9 | 申请日： | 2006-03-14 |
| 公开（公告）号： | CN1818620A | 公开（公告）日： | 2006-08-16 |
| 发明（设计）人： | 刘慧刚;徐立红 | 申请（专利权）人： | 浙江大学 |
| 主分类号： | G01N21/64 | 分类号： | G01N21/64;C12Q1/02 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 310031浙江省杭*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 一种改良的细胞内活性氧检测方法。培养细胞长满单层后，置于37℃、50mL/LCO2/950mL/L空气的培养箱，24h后加入不同浓度的刺激物，继续孵育1小时；去掉刺激物，加入DCFH－DA，加入的DCFH－DA浓度应根据实际观察到细胞浓度进行调整；去掉DCFH－DA，用PBS洗涤2次，检测细胞荧光强度。本发明的特点是加入的DCFH－DA浓度根据实际观察到细胞浓度进行调整。 | ||
| 搜索关键词： | 改良 细胞内 活性氧 检测 方法 | ||
【主权项】：
1、一种改良的细胞内活性氧检测方法。其特征在于，该方法按下列步骤顺序进行：(1)培养细胞长满单层后，用胰蛋白酶消化并混悬于含100mL/L FCS的DMEM培养液中，调整细胞数为2×107/L，以每孔100μL加入96孔培养板中。(2)置于37℃、50mL/L CO2/950mL/L空气的培养箱，24h后加入不同浓度的刺激物，并设对照组加入等量DMEM，继续孵育1小时。(3)去掉刺激物，加入DCFH-DA，注意：加入的DCFH-DA浓度应根据实际观察到细胞浓度进行调整。(4)去掉DCFH-DA，用PBS洗涤2次，检测细胞荧光强度。激发波长488nm，发射波长530nm。
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