[发明专利]用于类风湿关节炎基因治疗的重组腺病毒载体

摘要

本发明涉及一种用于类风湿关节炎基因治疗的重组腺病毒载体，步骤是：1)将小鼠脾细胞RNA逆转录成为cDNA后，用聚合酶扩增出IL－18BP，IL－4基因序列，并用直链氨基酸接头构建成IL－18BP与IL－4融合基因；2)将融合基因和穿梭载体pShuttle－CMV质粒用BglII和HindIII双酶切后利用T4DNA连接酶进行连接，获得连接产物PSC－IL－18BP/IL－4；3)将连接产物和对照质粒PSC－LacZ电转化入BJ5183－AD－1感受态细菌中后获得AD－IL－18BP/IL－4和AD－LacZ对照腺病毒载体质粒；4)扩增经鉴定正确的腺病毒载体质粒，用PacI酶切纯化后将质粒转入AD293细胞中，当出现细胞病变效应时，收获细胞及培养上清，收集上清感染AD293细胞。本发明的有益效果是：用此重组腺病毒治疗，可缩短类风湿关节炎病程，抑制关节炎病变，减轻关节炎症程度，发挥抗类风湿关节炎的作用。

主权项

1、一种用于类风湿关节炎基因治疗的重组腺病毒载体，其特征是：主要包括以下步骤：1)、将小鼠脾细胞RNA逆转录成为cDNA后，用高保真聚合酶扩增出IL-18BP，IL-4基因序列，并用通用直链氨基酸接头(Gly-Gly-Gly-Gly-Ser)3将IL-18BP与IL-4两个基因连接后，构建成IL-18BP与IL-4融合基因；2)、将IL-18BP与IL-4融合基因和AdEasy系统中的穿梭载体pShuttle-CMV(PSC)质粒用BglII和HindIII双酶切后利用T4 DNA连接酶进行连接，获得连接产物PSC-IL-18BP/IL-4；3)、将连接产物PSC-IL-18BP/IL-4和对照质粒PSC-LacZ电转化入BJ5183-AD-1感受态细菌中后获得AD-IL-18BP/IL-4和AD-LacZ对照腺病毒载体质粒；4)、扩增经鉴定正确的腺病毒载体质粒，用PacI酶切纯化后，应用MBS转染试剂盒将质粒转入50％-70％融合的AD293细胞中，当出现细胞病变效应时，收获细胞及培养上清，-70℃～37℃反复冻融3次，剧烈振荡后离心收集上清，感染AD-293细胞，-70℃备用。