[发明专利]一种基于mtDNA的中华鳖种质鉴定方法

摘要

本发明公开了一种基于mtDNA的中华鳖种质鉴定方法，包括样品收集和鉴定、总DNA提取、DNA质量检测、目的基因片段的扩增、扩增产物的检测、对目的基因进行序列测定、序列校对、建立中华鳖种质标准分子系统树、收集待鉴定中华鳖的mtDNA序列、与已构建中华鳖种质标准分子系统树的各品系相应序列进行比较等步骤，根据序列比较，建立新的系统树，进行亲缘关系分析，最后判定待鉴定中华鳖的品系。它避免了利用形态学原理进行鉴定时存在的证据不具问题，能对中华鳖进行更为合理、准确的种质鉴定。

主权项

1、一种基于mtDNA的中华鳖种质鉴定方法，其特征在于，它包括如下步骤：I、建立中华鳖基于mtDNA的种质鉴定标准，包括下列分步骤：1.1、样品收集和鉴定：取中华鳖各品系种质特征显著的原种作样品；1.2、总DNA提取：提取全基因组DNA；1.3、DNA质量检测：利用紫外分光光度计测DNA的浓度和纯度，并电泳检测DNA的浓度和纯度；1.4、目的基因片段的扩增：采用聚合酶链式反应技术进行目的基因片段的扩增；1.5、扩增产物的检测：扩增产物的浓度和纯度的检测方法与步骤1.3相同，但电泳的时间缩短到40min以内，以适应PCR产物片段较小的特点；1.6、对目的基因进行序列测定；1.7、序列校对：将取得的测序报告进行人工判读，使用Chromas对测序图进行观察，将干扰信号修正或去除；然后将双向测序的结果输入Genedoc，进行双向对齐，以减少误差，对齐时使用缺省设置。1.8、建立中华鳖种质标准分子系统树：进行亲缘关系分析，构建中华鳖种质标准分子系统树。II、中华鳖种质鉴定，包括下列分步骤：2.1、以待鉴定中华鳖为对象，进行第I个步骤中1.1--1.6各分步骤操作；2.2、将校正后的待测中华鳖mtDNA序列与已构建中华鳖种质标准分子系统树的各品系相应序列进行比较；2.3、根据序列比较，建立新的系统树，进行亲缘关系分析，判定待鉴定中华鳖的品系。