[发明专利]永生化猪肝细胞的制备方法无效
| 申请号： | 200610050853.1 | 申请日： | 2006-05-23 |
| 公开（公告）号： | CN1869205A | 公开（公告）日： | 2006-11-29 |
| 发明（设计）人： | 李兰娟;潘小平 | 申请（专利权）人： | 浙江大学 |
| 主分类号： | C12N5/06 | 分类号： | C12N5/06 |
| 代理公司： | 杭州中成专利事务所有限公司 | 代理人： | 冯子玲 |
| 地址： | 310003浙江省杭州市上城区庆*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 永生化猪肝细胞的制备方法，包括以下步骤：用Dispase－胶原酶灌流法获高活率的新鲜原代猪肝细胞，经过24h培养后，在浓度为8ūg/ml的polybrene存在下，用含SV40大T抗原的重组逆转录病毒的细胞上清对原代猪肝细胞进行感染，1周后，用500ūg/ml的G418进行药物压力筛选，待细胞克隆出现并生长至1.0－2.0cm时，挑取单个克隆的细胞扩大培养，获得能够传代的猪肝细胞。在浓度为8ūg/ml的polybrene存在下，用含人端粒酶逆转录酶的重组逆转录病毒的细胞上清对能够传代的猪肝细胞进行再次感染，1周后，用2ūg/ml的嘌呤霉素进行药物压力筛选，待细胞克隆出现并生长至1.0－2.0cm左右时，挑取单个克隆的细胞扩大培养，获永生化猪肝细胞。 | ||
| 搜索关键词： | 永生 猪肝 细胞 制备 方法 | ||
【主权项】：
1、永生化猪肝细胞的制备方法，其特征在于以下步骤：(1)用Dispase-胶原酶灌流法分离猪的肝脏组织，得到高活率的新鲜原代猪肝细胞，经过24h培养后更换培养液，在浓度为8ūg/ml的polybrene存在下，用含SV40大T抗原的重组逆转录病毒的细胞上清对原代猪肝细胞进行感染，1周后，用500ūg/ml的G418进行药物压力筛选，待细胞克隆出现并生长至1.0-2.0cm时，挑取单个克隆的细胞接种于6孔板，扩大培养，获得能够传代的猪肝细胞。(2)在浓度为8ūg/ml的polybrene存在下，用含人端粒酶逆转录酶的重组逆转录病毒的细胞上清对能够传代的猪肝细胞进行再次感染，1周后，用2ūg/ml的嘌呤霉素进行药物压力筛选，待细胞克隆出现并生长至1.0-2.0cm时，挑取单个克隆的细胞接种于6孔板，继而进行扩大培养，获得永生化猪肝细胞。
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