[发明专利]小麦矮腥黑穗病菌实时荧光PCR固相化试剂盒及其检测方法

摘要

本发明依据随机引物介导的多聚酶链式反应(RM－PCR)，从美国小麦矮腥黑穗菌(Tilletia controversa KuhnTCK)基因组DNA中克隆鉴定的端粒相关序列特征片段；并研制出基于差异片段序列的特异性引物、探针和实时荧光PCR固相化试剂盒，用于TCK冬孢子或侵染菌丝体等不同样品诊断、鉴定的快速检测方法，从样品制备到检测结果的全过程仅需4小时，固相化试剂盒灵敏度高(几百个拷贝)、特异性强(仅检出TCK)、稳定可靠。该发明可以准确地区分TCK与近源种腥黑穗菌如小麦网腥黑穗菌(Tilletiatriticii Tul，TCT)，解决了形态学鉴定既费时且不准确的难题，可以满足进境疫麦的快速鉴定和后期监管的需求，适用于小麦矮腥黑穗病的早期诊断，麦粒包装等带菌材料的分子检验和近缘种的诊断鉴定。

主权项

1.一种小麦矮腥黑穗病菌的片段基因序列，其特征是：长度为1322个核苷酸，包括5’端和3’端，序列如下：01AGTCAGCCACCACCGCCTTTGTCGCAACAGAGCGTGATTGGTCACCCTAGAGCTTCCATG61ACACTGGGAGCTTTATGGAAAGACGGTACCTTAGTCTTCTGGCGCGGCTCCTCTTAAAGC121CGCTGGATGAAGTCTAACTTACCTCGCGGATGGTATGCAGCCATATGACAAGGGTATAAA181GACGTGTATACACAGGAGTGCCGTCGCCCTTCACTGGTCCGAGCCACACGGCACGTCAAA241GACAGGCCGGGCATCCCCGTATATCTTGCCGTGCGCTGTGCACTCCTGCCGCCACATCGT301TTTACATTCTACACAGTACCAAAACAAATCCATCAGATCATGGTTTATCCTCGTCTCTTC361CTCGCTCTCCTTCTCCTCCTTCTGGCCGCAGCTGACACATCTGCGTTCCTGACCGATCGC421GTGTGCGTTTGGTGCCCGGCTGTATCTCAGTAGTCCAATGTGAGTCCGTTCTGATCGACG481TTGTTTGCCTCCGCCAGGCGTTCACATGTTGATTTTAATACAGATCGAAGCTCGTGCAAA541CCCACCAGCCCGCTCAAACAAGTAGCAGACGGACATGTGGTTTCAATCAAGCTTAAATCC601CAAAGGCTTGATGTGTGTGGCCAAAAATGTGCTGTGAAGATGTGCAGGGGATAGGGAAGG661AGGGCGACAGGGCGAGAGGGCGA AAGGCTGGAAGATTGGAAGGGCGGTAGGTATCGAAAG721ACACGGATGACATCAGCACGGAAGAAGGATTTTGCGAATGGTAGTGCTGAGGCCGAAAAG781GTAAATTGGTGCTCAGAGCTCCGTTCCTCCGCGAAGCGAAAACTTCGGCGTTACGTTGCT841AACGATGTGGCGAAACTCTTTATCCACCCGTCACTGCGTCCTGTGTACGGGTACAATTCA901GATATATGAGTACGCTTTGATATATACGATTACGGTGGCTGAATACGTCGTGGAGCCCAG961AAGAGAGAATCTGTAGGGCCTTTGCACTCTGTACGCTAATGGTAGAATAATGTGGAACGC 1021ATCCTGCCGCCTCACAGCGATACATTTTGCGTTGTCGATCTGGACGCTCTATGGAATGCA1081CTGGATCGATGGAGGGCAATGCTCCAACCGTCCGAAGTACTGTTAGCACGATATCTCGCA1141ACACAATTCTGTTCAATGTCATGTCGCCTCGATTACTCTTGCGTCGATGAACCCGACGTT1201CTGATCGTACACATTCCGTCGACAATAATAATTACTCTTTGGCCTCAGTATTGCCCTTTG1261GCCGTTATCTCAAGAGGTTACACATATCACTGTACATAGTTCGTCCGTGTGCTCGGCTGA1321CT。