[发明专利]在西藏八角莲发根中表达外源目的基因的方法

摘要

本发明提供了一种利用基因工程技术在西藏八角莲发根中表达外源目的基因的方法。涉及包含工程化农杆菌的构建和遗传转化西藏八角莲，获得表达外源基因的西藏八角莲发根的方法。其过程是用工程化农杆菌遗传转化西藏八角莲，获得了西藏八角莲发根，通过筛选获得表达外源目的基因的西藏八角莲发根，经分子检测确认携带外源目的基因的转化发根。本方法建立了基于西藏八角莲发根的高效外源基因表达系统，为将鬼臼毒素生物合成途径中的关键酶基因导入西藏八角莲，实现其次生代谢工程以及开展产鬼臼毒素植物的分子育种奠定了基础。

主权项

1.一种利用基因工程技术在西藏八角莲发根中表达外源目的基因的方法，首先，构建同时携带诱导发根质粒和外源基因表达载体的工程化农杆菌，采用在含诱导发根的质粒pRiA4的卸甲根癌农杆菌C58C1中导入植物高效表达载体，也即外源基因表达载体p1304，从而获得工程化农杆菌，其步骤如下：(1)培养携带pRiA4的卸甲根癌农杆菌C58C1；(2)制备携带pRiA4的卸甲根癌农杆菌C58C1感受态细菌；(3)外源基因表达载体p1304对携带pRiA4的卸甲根癌农杆菌C58C1进行转化；(4)对同时携带pRiA4和p1304的C58C1单克隆的筛选与鉴定；然后，采用转基因技术，用工程化农杆菌遗产转化西藏八角莲的细胞、组织、器官、植株，获得西藏八角莲转基因发根，其步骤如下：(1)西藏八角莲无菌外植体的获得；(2)活化工程化农杆菌；(3)工程化农杆菌浸染西藏八角莲；(4)工程化农杆菌与西藏八角莲的共培养；(5)西藏八角莲的除菌培养；(6)西藏八角莲转基因发根的获得与继代培养；(7)西藏八角莲转基因发根的分子检测。