[发明专利]贯叶连翘中金丝桃苷和金丝桃素的制备方法

摘要

一种贯叶连翘金丝桃苷和金丝桃素的制备方法，涉及金丝桃苷和金丝桃素药用活性成分的制备方法本发明综合利用我国丰富的贯叶连翘果实，同时制备出总收得率和产品纯度均高的金丝桃苷和金丝桃素两种药用活性成分，生产成本低；在生产过程中，实现了多种溶剂如乙醇乙醚的回收和再次反复使用；实现了反胶束萃取剂及吸附树脂的再生和反复使用采用本发明方法制备出的植物生物活性物质，可广泛应用于清热解毒收敛止血利尿及抑郁治疗等药物中。

主权项

1.一种贯叶连翘中金丝桃苷和金丝桃素的制备方法，其特征在于具体的方法步骤如下：(1)连翘浸膏的制备将贯叶连翘果实粉碎成连翘粉后，按连翘粉重量与85～95％的乙醇体积的比为1∶10～20的比例，在连翘粉中加85～95％的乙醇，在70～85℃温度下，回流提取4～6小时，再进行过滤，收集滤液。对滤渣，按滤渣重量与70～80％的乙醇体积的比为1∶5～10的比例，用70～80％的乙醇再进行回流提取2～3小时后，再过滤并收集滤液，弃滤渣，然后，将两次收集的滤液放置于蒸发器中，在-0.08～-0.05MPa真空下浓缩成贯叶连翘浸膏并回收的乙醇，对回收蒸馏的乙醇用酒精度计测定其中乙醇浓度，再用无水乙醇调节成乙醇浓度为85～90％的溶液；(2)金丝桃苷浓缩液的制备①洗涤在第(1)步制备的连翘浸膏中，加入乙醚搅拌洗涤，再进行离心分离；分别收集脱脂连翘浸膏和乙醚洗涤液，对脱脂连翘浸膏再次进行乙醚搅拌洗涤及再分离，如此反复进行2～4次，每次加入的乙醚洗涤液，按连翘浸膏的重量与乙醚的体积的比例为1∶3～5；②吸附对第(2)-①步制备的脱脂连翘浸膏，在带搅拌器的液体回流装置中，用沸腾蒸馏水重复进行2～4次搅拌提取，每次提取时间为15～30分钟，收集金丝桃苷提取液，然后，将每次收集的金丝桃苷提取液合并后，待其温度降至40～50℃时，按吸附树脂重量与金丝桃苷提取液体积比为1∶15～25的比例，在金丝桃苷提取液中，加入HPD600或HZ-841吸附树脂，搅拌吸附30～60分钟，弃滤液；③洗脱对第(2)-②步制备出的吸附有金丝桃苷的HPD600或HZ-841吸附树脂，用4～6倍重量的蒸馏水进行洗涤后，再按吸附有金丝桃苷的HPD600或HZ-841吸附树脂重量与70～80％乙醇的体积比为1∶10～15的比例，用70～80％的乙醇进行搅拌洗脱，搅拌洗脱时间为30～45分钟，再进行过滤，并分别收集滤液和滤渣，对收集的洗脱金丝桃苷后的HPD600或HZ-841吸附树脂滤渣，再按吸附树脂重量与70～80％乙醇的体积比为1∶10～15的比例，用70～80％的乙醇再次进行搅拌洗脱，再次进行过滤，再次分别收集滤液和滤渣，如此重复2～4次；④浓缩对第(2)-③步收集并合并的金丝桃苷溶液，在真空浓缩器中、在-0.08～-0.05MPa下进行真空浓缩，待浓缩成膏状后，再用pH值为8.50～9.0的蒸馏水溶解，然后进行过滤除去杂质，制备出金丝桃苷浓度为2.31～2.80％的金丝桃苷浓缩液；⑤吸附树脂再生将第(2)-③步收集的洗脱金丝桃苷后的HPD600或HZ-841吸附树脂，先用重量为10～15倍的、pH值为5～6的水溶液搅拌洗涤再生，搅拌洗涤时间为30～60分钟，后进行过滤，弃滤液，收集再生吸附树脂滤渣；(3)萃取剂的制备按十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)阳离子表面活性剂重量∶正辛烷体积∶正庚烷体积∶蒸馏水体积为1∶27～54∶3～6∶0.3～0.6的比例，在CTAB阳离子表面活性剂中，先加入正辛烷和正庚烷，加热搅拌，其加热温度为40～60℃，后加入蒸馏水，继续搅拌至透明状，就制备出CTAB浓度为0.05～0.1mol/L的CTAB反胶束萃取剂；(4)萃取分离①萃取分离在第(2)-④步制备的金丝桃苷浓缩液中，加入第(3)步制备的CTAB反胶束萃取剂，其金丝桃苷浓缩液∶CTAB反胶束萃取剂的体积比为1∶3～5，混合后，在转速为200～300转/分的低转速下搅拌萃取1～1.5小时，然后用离心机在6500～8000转/分的高转速下，离心分离10～20分钟，混合液分离为明显的上、下两相，分别收集上相萃取有金丝桃苷的反胶束萃取液及下相金丝桃苷第一次萃余溶液；②再萃取分离在第(4)-①步收集的下相金丝桃苷第一次萃余溶液中，又加入第(3)步制备的CTAB反胶束萃取剂，其金丝桃苷第一次萃余溶液体积∶CTAB反胶束萃取剂的体积比为1∶1～3，混合后，在转速为200～300转/分的低转速下，再次搅拌萃取1～1.5小时，然后再用离心机在6500～8000转/分的高速下，再次离心分离10～20分钟，混合液分离为明显的上、下两相，再次收集上相萃取有金丝桃苷的反胶束萃取液及下相金丝桃苷第二次萃余溶液；(5)金丝桃苷冻干粉的制备①水反萃取分离在第(4)-①和②步两次收集的上相萃取有金丝桃苷的反胶束萃取液中，按水与萃取有金丝桃苷的反胶束萃取液的体积比为1∶1～3，加入水溶液反萃取剂并混合，先在转速为200～300转/分的转速下进行搅拌反萃取15～30分钟，后用离心机在6500～8000转/分的高速下，离心分离30～60分钟，混合液明显分为上、下两相，分别收集上相反萃取后的反胶束萃取液及下相反萃取后的金丝桃苷溶液；②浓缩冻干对第(5)-①步收集的下相反萃取后的金丝桃苷溶液，先用蒸发器在-0.08～-0.05MPa真空进行浓缩，后用冻干机在-50～-60℃低温下，冻成金丝桃苷含量为83.6～87.3％、水份≤7.26～8.76％、灰分≤0.44～8.94％的金丝桃苷冻干粉；③反胶束萃取液再生对第(5)-①步收集的上相反萃取后的反胶束萃取液，按0.2～0.5mol/L碘化钾溶液与反胶束萃取液的体积比为1∶100～150的比例加入0.2～0.5mol/L KI溶液混合，在转速为200～300转/分的转速下，进行搅拌处理30～60分钟，然后在4000～6000转/分转速下，离心分离15～30分钟，分别收集上层反胶束萃取液及下层KI溶液，对KI溶液，补充适量的KI，使其浓度为0.2～0.5mol/L；(6)金丝桃素冻干粉的制备①吸附洗涤对第(2)-①步收集合并的乙醚洗涤液，用温度为50～65℃的水蒸汽蒸馏回收乙醚，然后用0.5～1％NaHCO3水溶液溶解金丝桃素浸膏，金丝桃素浸膏重量与0.5～1％NaHCO3水溶液体积的比例为1∶15～25，将制备出的含金丝桃素的NaHCO3水溶液与第(4)-②步收集的下相金丝桃苷第二次萃余溶液合并为金丝桃素溶液，然后在金丝桃素溶液中加入HPD100或HPD200非极性吸附树脂，在转速为200～300转/分的速度下，进行搅拌吸附，搅拌吸附的时间为1～2小时，非极性吸附树脂重量与金丝桃素溶液的体积比例为1∶10～15，然后过滤除去滤液后，收集吸附有金丝桃素的吸附树脂，再用pH值为8.50～9.50、浓度为90～95％的乙醇，在200～300转/分搅拌速度下进行搅拌洗脱，搅拌洗脱时间为30～60分钟，过滤，分别收集洗脱液滤液和吸附树脂滤渣，对收集的吸附树脂滤渣，再次用90～95％的乙醇进行搅拌洗脱，吸附树脂重量与乙醇体积的比例均为1∶10～15，再次过滤并分别收集滤液和滤渣，如此反复进行2～4次；②浓缩冻干对第(6)-①步收集的金丝桃素纯化溶液，先用蒸发器在-0.08～-0.05Mpa的真空下，回收乙醇，浓缩成膏状金丝桃素，然后用0.5～1％的NaHCO3水溶液对膏状金丝桃素进行溶解，溶解成为金丝桃素NaHCO3水溶液，膏状金丝桃素重量与0.5～1％NaHCO3水溶液体积的比例为1∶20～30，对金丝桃素的NaHCO3水溶液，再进行过滤除去杂质，对其滤液用冻干机，在-50～-60℃的低温下冻成金丝桃素含量为22.82～26.35％的金丝桃素冻干粉；③吸附树脂再生对第(6)-①步收集的洗脱金丝桃素的HPD100或HPD200吸附树脂，用pH值为5～6的水溶液搅拌洗涤，再进行过滤分离，弃滤液，收集吸附树脂滤渣，对收集的吸附树脂再次用pH值为5～6的水溶液搅拌洗涤，再次过滤并收集吸附树脂，如此反复进行2～4次，吸附树脂重量与pH值为5～6的水溶液体积的比例每次均为1∶10～20，每次搅拌洗涤的时间为30～60分钟。