[发明专利]一种验证性筛选目的结构域结合配体的方法

摘要

本发明公开了一种验证性筛选目的结构域结合配体的方法。该方法包括以下步骤：1)以目的结构域家族中结合特性有代表性的成员为诱饵蛋白筛选酵母双杂交文库；2)收集步骤1)筛选获得的结合配体克隆以及其它已知或可能的目的结构域结合配体克隆，得到目的结构域结合配体文库；3)以该结构域家族中的其它成员或步骤1)中的成员为诱饵蛋白，用酵母双杂交系统验证性筛选步骤2)构建的结合配体文库，得到目的结构域的阳性和阴性结合配体；4)分析步骤1)和/或步骤3)筛选得到的目的结构域的阳性和阴性结合序列，总结结合特性和共有结合序列；5)预测目的结构域的配体蛋白；6)验证预测的相互作用，得到与目的结构域相互作用的配体蛋白。

主权项

1、一种验证性筛选目的结构域结合配体的方法，包括以下步骤：1)用酵母双杂交系统，以目的结构域家族中结合特性有代表性的成员为诱饵蛋白筛选酵母双杂交文库，所述酵母双杂交文库包括随机多肽文库、或任一物种的细胞或组织的基因组文库或cDNA文库；2)建立目的结构域结合配体文库：收集步骤1)筛选获得的结合配体克隆以及其它已知或可能的目的结构域结合配体克隆，得到目的结构域结合配体文库；3)以该目的结构域家族中的其它成员或所述步骤1)中的结构域成员为诱饵蛋白，用酵母双杂交系统验证性筛选步骤2)构建的结合配体文库，得到目的结构域的阳性和阴性结合配体；4)对步骤1)和/或步骤3)中筛选得到的每个目的结构域的阳性结合配体序列和阴性结合配体序列进行序列分析，总结每个目的结构域的结合特性，推测其共有结合序列；5)用步骤4)中推测的共有结合序列检索蛋白质数据库，预测蛋白质数据库中所有可能与目的结构域结合的配体蛋白；再根据蛋白质的生物学信息，进一步预测最有可能的目的结构域的配体蛋白；6)用常规的鉴定蛋白质相互作用的方法验证步骤5)预测的目的结构域结合配体蛋白，得到与目的结构域相互作用的配体蛋白。