[发明专利]一种抗肿瘤的药物组合物及其制备方法

摘要

本发明公开了一种抗肿瘤的药物组合物及其制备方法，该药物组合物主要由三七提取物和冬虫夏草菌丝体组成。本发明另一目的在于提供该药物组合物制剂的抗肿瘤的用途。

主权项

1、一种治疗肿瘤的药物组合物，其特征在于该药物组合物是由如下方法制成：原料药：三七提取物10-50重量份 冬虫夏草菌丝体菌粉30-100重量份；工艺步骤：取5-15目三七粗粉，用40-100％乙醇回流提取1-4次，每次1-3小时，收集提取液，过滤，滤液回收乙醇，至无乙醇味后，真空浓缩1.5-2小时，浓缩液加入等体积蒸馏水，搅拌均匀，过滤，滤液过大孔吸附树脂柱吸附；用2-4倍量树脂床体积蒸馏水洗去水溶性杂质，吸附人参皂苷的树脂柱备用；将上述吸附树脂柱用20-50％乙醇洗脱，20-50％乙醇用量为1-5倍量树脂床体积，主要分离去除原人参三醇组皂苷，根据需要另行处理；用薄层色谱法跟踪检测，其中的薄层色谱法是：展开剂为30-100∶10-50∶2-20的氯仿∶甲醇∶水下层；显色剂：5-20％硫酸乙醇溶液；当薄层色谱上出现原人参二醇组皂苷斑点后，停止用20-50％乙醇洗脱，改用30-100％乙醇洗脱，并收集洗脱液；用0.5-2％活性炭加热回流0.5-2小时脱色，过滤去除活性炭，滤液过大孔阳、阴离子交换柱，进一步脱色脱盐除杂，并用30-100％乙醇洗脱树脂吸附的原人参二醇组皂苷，回收乙醇，真空浓缩，真空干燥，粉碎，收集原人参二醇组皂苷约为提取物投料量的3-4％；取上述纯化的原人参二醇组皂苷粉溶解于30-70％醋酸、20-50％枸橼酸、20-50％草酸、20-50％丙二酸、0.5-2％盐酸或0.5-2％硫酸的水或乙醇溶液中，控制反应条件：酸浓度为1％-55％，水解温度为20℃-100℃，水解时间为0.5小时-10小时，进行酸水解，反应完成后加入与水解转化液等体积的蒸馏水，用6％氢氧化钠溶液中和至中性，收集水解产物的沉淀，用10倍量蒸馏水，分2-3次洗沉淀，真空干燥，粉碎，备用，收率为投料原人参二醇组皂苷的30-40％；将水解产物溶解于5-10倍量50-140％乙醇中，以60℃-70℃加热，回流加快溶解，过滤，滤液用1％活性炭加热回流0.5-2小时脱色，过滤去除活性炭，滤液过大孔阳、阴离子交换柱，进一步脱色脱盐除杂，并用30-100％乙醇洗脱树脂，回收乙醇至总体积的1/4-1，冷却，放置结晶，真空抽滤，收集结晶，真空干燥，粉碎；用高效液相色谱法测定人参皂苷Rh2和Rg3的含量；人参皂苷Rh2含量为24.84％，人参皂苷Rg3含量为44.44％；收率约为原人参二醇组皂苷投料量的4-5％；将采集的冬虫夏草带回实验室，采用单孢子分离法和组织块分离法分离；冬虫夏草菌用PDA培养，10-20℃培养，根据冬虫夏草菌的菌落特征，经过多次挑取接种后，在培养基上未见其他菌落生长，说明菌种已经纯化过程，得到冬虫夏草真菌；冬虫夏草真菌按每袋培养基0.3kg接入1g菌种的比例，使其在PDA培养基上生长，即分离得到冬虫夏草菌菌种菌落；菌落在PDA培养基上生长缓慢，菌落紫褐色，紧实，背面褐色；菌丝无色，分隔，光滑，分生孢子梗无色，单生或簇生与无色球形细胞组成的小子座；菌落圆形，边缘整齐，致密；用接种环将菌种接入PDA培养基，在火焰上将环端烧红灭菌，然后将有可能伸入试管的其余部分，均用火烧过灭菌；将灼烧过的接种环伸入菌种管，先使环接触没有长菌的培养基部分，使其冷却；待环冷却后沾取少量菌或袍子，然后将接种环移出接种管，在火焰旁迅速将沾有菌种的接种环伸入另一支待接斜面试管；从斜面培养基的底部向上部作“Z”形来回密集划线；取出接种环，灼烧试管口，并在火焰旁将棉塞塞上；10-20天后，再把试管培养基上的真菌接入固体或液体发酵培养基，保持10～15℃培养；固体培养基为大米与水的比例为0.8-1.2∶0.9～1.2，每升培养基中还要加入蛋白胨10-20克，蔗糖180-220克，牛肉膏20-30克，磷酸二氢钾3-7克，PH5-8；当菌丝充满整个培养基时，将菌丝分离、烘干即为菌丝体成品，菌丝体粉碎即冬虫夏草菌丝体菌。