[发明专利]一种深海适冷微生物胞外多糖的制备方法

摘要

一种新的深海适冷微生物胞外多糖的制备方法，属于海洋生物技术领域。本发明提供以胞外多糖产率高的深海适冷菌Pseudomonas sp.SM9913为菌株通过液体深层发酵制备胞外多糖的工艺，得到分离纯化的胞外多糖，解析其结构，乙酰基的引入使分子的伸展变化，导致多糖羟基基团的暴露，增加其在水中的溶解性，从而提高其生物活性。本发明的所制备的多糖纯品可广泛用于药物、生物技术领域、食品、环保、化妆品等领域。

主权项

1、一种深海适冷微生物胞外多糖的制备方法，包括如下步骤：(1)种子制备培养基：豆饼粉2～3份、玉米2～3份、麸皮1～1.5份、Na2HPO4 0.4～0.5份、KH2PO4 0.03～0.04份和水100份，均为重量份，培养基100-120℃灭菌30-50分钟，冷却后，以深海适冷菌Pseudomonas sp.SM9913为菌株，接茄子瓶菌种的菌悬液，接种量5-7％质量百分比；通风，搅拌，培养；得种子液，待用；(2)液体深层发酵制备胞外多糖发酵液培养基，：豆饼粉3～3.5份、玉米粉2.5～3份、山芋粉2.5～3份、麸皮2.0～2.5份、Na2HPO4 0.4～0.5份、KH2PO4 0.03～0.04份和水100份，均为重量份；1000升发酵罐，装450升培养基，灭菌后pH6.2～6.3，接种步骤(1)制备的种子5～7％，搅拌200～220转/分，控制通风量0-12小时1∶0.5～0.6，12-20小时1∶0.6～0.7，20-28小时1∶0.8～0.9，控制培养温度10～12℃，发酵48～72小时；(3)胞外多糖发酵液的后处理上述胞外多糖发酵液经10000rpm离心，然后离心上清液用无水乙醇沉淀，上清液体积与无水乙醇体积比例为1∶3，除蛋白、脱色后，离心干燥得到多糖粗制品。多糖粗品在60～70℃热水中重溶，浓缩至原体积的20～30％，再经过凝胶过滤层析和离子交换层析技术分离，真空冷冻干燥，得到多糖的纯品。