[发明专利]一种巨噬细胞转移抑制因子单克隆抗体及其制备方法

摘要

本发明涉及生物医药工程技术领域，是包括涉及抗人巨噬细胞转移抑制因子(hMIF)单克隆抗体制备及其氨基酸序列获得的方法。本发明经逆转录聚合酶链式反应从人乳腺癌细胞株MDA－MB453和人乳腺癌组织扩增出hMIF基因，构建pET－11b/hMIF重组质粒，在大肠杆菌BL21(DE3)表达并纯化后免疫Balb/c小鼠，通过杂交瘤技术获得小鼠脾细胞和SP2/0细胞融合的抗hMIF单克隆抗体高表达高效价杂交瘤细胞株，即2D₁₀，再经抗体亚类鉴定和抗体的特异性实验，杂交瘤单克隆细胞株2D₁₀分泌的单克隆抗体属于IgG，轻链是K型，其轻链可变区的氨基酸序列为：CRASGRNNAWYKGADGWYKGKAKRYAASSSGVSRSGSGSGTTTSSDATYYCHNDAVYSYGTKVKR，重链可变区的氨基酸序列为：VWSGGSTVKGGRSCGYYASGTSTYSMGMNWVRAGKGWVSSSTSVDTYYYADSVKGRTSRDNAKNSYDYDVSRADTAVYYCARDGASSGWGVDATGSRVSCYWGGTVSSWMSAT。本发明通过上述技术方案获得的抗hMIF单克隆抗体，为进一步的人源化改造提供有效的依据，可用于检测动物和人体中巨噬细胞转移抑制因子含量，为进一步的临床治疗全身性炎症反应综合征奠定基础。

主权项

1.一种人巨噬细胞转移抑制因子单克隆抗体及其制备方法，其特征在于：a.重组人巨噬细胞转移抑制因子的原核表达：经逆转录聚合酶链式反应，应用上游引物CGCGGATCCTGCGGCTCTTAGGCGAAGG和下游引物CGCCATATGCCGATGTTCATCGTAAACAC，从人乳腺癌细胞株MDA-MB453和人乳腺癌组织扩增出人巨噬细胞转移抑制因子基因，构建pET11b/hMIF重组质粒，转化大肠杆菌BL21(DE3)进行重组人巨噬细胞转移抑制因子的表达；b.重组人巨噬细胞转移抑制因子纯化：用阳离子交换介质和疏水层析介质分离纯化；c.抗重组人巨噬细胞转移抑制因子单克隆抗体的制备：用纯化的人巨噬细胞转移抑制因子免疫小鼠，通过杂交瘤技术经多次细胞融合获得杂交瘤细胞，经抗体亚类鉴定和抗体的特异性实验筛选出分泌抗人巨噬细胞转移抑制因子单克隆抗体的杂交瘤细胞株2D10，对杂交瘤细胞克隆化和分泌抗体亚类的鉴定，2D10分泌的单克隆抗体属于IgG，轻链是κ型；d.抗人巨噬细胞转移抑制因子单克隆抗体轻链可变区的氨基酸序列为：CRASGRNNAWYKGADGWYKGKAKRYAASSSGVSRSGSGSGTTTSSDATYYCHNDAVYSYGTKVKR，重链可变区的氨基酸序列为：VWSGGSTVKGGRSCGYYASGTSTYSMGMNWVRAGKGWVSSSTSVDTYYYADSVKGRTSRDNAKNSYDYDVSRADTAVYYCARDGASSGWGVDATGSRVSCYWGGTVSSWMSAT。