[发明专利]检测突变和/或多态性的方法

摘要

本发明的方法基于这样一种方法，其中利用作为相同链的核苷酸序列存在的靶核苷酸序列的特定区域上的，通过互补链合成而合成的杂交的3’末端作为下一轮互补链合成的起点来合成核酸。根据本发明，重复进行与需检测突变和多态性的特定区域的杂交。因此，靶核苷酸序列中的突变和多态性被精确地拷贝到反应产物上。

主权项

1.检测靶核苷酸序列特定区域内的突变和/或多态性的方法，它包括以下步骤：(1)在允许互补链合成的条件下保温下列组分(a)至(e)，其中将第二和第一引物用作起点；(a)含有靶核苷酸序列的核酸样品；(b)催化包括链置换的互补链合成的DNA聚合酶；(c)第二引物，其中第二引物的3’末端与一条所述靶核苷酸序列链3’侧的区域退火，第二引物的5’侧包括与推测核苷酸序列互补的核苷酸序列，它构成利用引物作为起点的互补链合成反应的产物上的区域；(d)第一引物，其中第一引物的3’末端与另一条所述靶核苷酸序列链3’侧的区域退火，第一引物的5’侧包括与推测核苷酸序列互补的核苷酸序列，它构成利用引物作为起点的互补链合成反应的产物上的区域；和(e)核苷酸底物；和(2)将利用靶核苷酸序列为模板的互补链合成反应所合成的产物的量与特定区域内突变和/或多态性的存在相联系，其中第二和第一引物的5’末端中的至少一个上所排列的核苷酸序列含有与所述特定区域的推测核苷酸序列或其互补链互补的核苷酸序列，其中当含有特定区域的核苷酸序列不是预想的核苷酸序列时，利用5’末端上排列的核苷酸序列为模板而合成的，并通过与特定区域或其互补链退火而用作互补链合成之起点的互补链会抑制互补链合成。