[发明专利]心肌分化相关蛋白Ybx－1的鉴定及其在心血管疾病治疗中的应用

摘要

本发明提供了一种基于蛋白质组学技术，研究P19CL6细胞向心肌细胞分化前后差异表达蛋白的筛选和鉴定方法。本发明在验证P19CL6细胞在1％DMSO诱导下成功分化成心肌细胞的基础上，应用上述的方法，提供了P19CL6细胞向心肌细胞分化前后有意义的差异表达蛋白。其中Ybx－1在P19CL6细胞分化为心肌细胞后表达上调，Ybx－1与P19CL6细胞向心肌细胞的分化密切相关，参与心肌细胞分化的表达调控。Ybx－1可用于干细胞种植心肌再生或心肌细胞重建治疗心脏疾病，尤其是心肌梗塞治疗。

主权项

1.一种寻找P19CL6细胞分化为心肌细胞前后差异表达蛋白的筛选和鉴定方法，该方法包括以下步骤：(1)样品进行双向电泳处理；(2)IPG胶条的等电聚焦分两步：首先是干胶条的泡胀过程，同时样品中的蛋白质也随电泳液一起进入胶内；第二步是真正的聚焦过程，蛋白质根据其等电点逐渐迁移到对应的pH位置；(3)第二向SDS平衡，SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳，凝胶染色；(4)图像扫描与分析，寻找差异蛋白点；(5)P19CL6向心肌细胞分化前后差异蛋白的鉴定，采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱分析方法，切取分离蛋白质组的差异蛋白点，用胰蛋白酶酶解后进行质谱分析，获得的肽图谱进行数据库查询，鉴定差异表达的蛋白，其中之一为Ybx-1蛋白。