[发明专利]湖泊沉积物中微生物总DNA的提取及生物量的鉴定方法无效
申请号: | 200610085355.0 | 申请日: | 2006-06-12 |
公开(公告)号: | CN1884544A | 公开(公告)日: | 2006-12-27 |
发明(设计)人: | 赵兴青;肖琳;于振洋;蒋丽娟;尹大强;杨柳燕;詹忠;肖元康 | 申请(专利权)人: | 南京大学 |
主分类号: | C12N15/31 | 分类号: | C12N15/31;C12Q1/06 |
代理公司: | 南京苏高专利事务所 | 代理人: | 陈扬 |
地址: | 210093*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | 本发明公开了一种湖泊沉积物中微生物总DNA的提取及生物量的鉴定方法,首先抽取部分样品冷冻干燥计算样品含水率;沉积物样品加入提取缓冲液以及SDS裂解,离心、去除腐质酸和多糖,沉淀分离得到单细胞;收集上清液加入高盐和阳离子去污剂消化,提抽;向上述水相中加入萃取剂沉淀,冷乙醇洗涤,临界干燥;最后对粗提液处理,紫外测定OD260nm/OD280nm吸光度,定量计算微生物总DNA以及单位沉积物生物量。本发明直接提取总DNA,整个过程简单、不需要花费贵重的药品,比较经济、实用。本发明特别适用于湖泊沉积物中微生物总DNA的提取及生物量的鉴定方法。 | ||
搜索关键词: | 湖泊 沉积物 微生物 dna 提取 生物量 鉴定 方法 | ||
【主权项】:
1、一种湖泊沉积物中微生物总DNA的提取及生物量的鉴定方法,其特征在于它包括如下步骤:(1)抽取沉积物样品冷冻干燥,并计算样品含水率;(2)配制核酸提取缓冲液,加入十二烷基磺酸钠混匀,将沉积物样品加入混合液中,裂解,离心,去除腐质酸和多糖,沉淀分离得到单细胞;(3)收集上清液加入高盐和阳离子去污剂十六烷基三甲基溴化铵消化,采用氯仿和异戊醇混合液提抽;(4)向上述步骤水相中加入萃取剂沉淀,并用醇类洗涤,临界干燥;(5)透析带电洗脱纯化回收对粗提液处理,紫外测定OD260nm/OD280nm吸光度,定量计算微生物总DNA以及单位沉积物生物量。
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