[发明专利]5'－核苷酸酶诊断试剂盒及5'－核苷酸酶活性浓度测定方法

摘要

本发明涉及一种酶循环扩增法(Enzymatic Recycling Method)的5’-核苷酸酶诊断试剂盒，同时本发明还涉及测定5’-核苷酸酶活性浓度的方法原理、试剂的组成及成分，属于医学检验测定技术领域。本发明的试剂盒可以是干粉状态，在使用前溶解后使用；也可以配制成液体试剂，直接使用。本发明的试剂盒主要成分包括：缓冲液、α-酮戊二酸、还原型辅酶、腺苷脱氨酶(Adenosine Deiminase EC 3.5.4.4)、谷氨酸脱氢酶(glutamate dehydrogenase EC 1.4.1.2、EC 1.4.1.3、EC1.4.1.4)、谷氨酸氧化酶(Glutamate oxidase EC 1.4.3.7、EC 1.4.3.11)、过氧化物酶(peroxidase EC 1.11.1.7)、还原型色原体组合、稳定剂及抗干扰剂，这些成分可以配成单剂试剂盒、双剂试剂盒或三剂试剂盒；通过一系列的酶促反应，最终将无色的还原型色原体组合氧化成有色的染料，从而可以通过可见光分析仪器，在400－700nm波长处，测定染料含量的高低，进而直接反映出5'－核苷酸酶活性浓度的大小。与现有技术相比，本发明不仅便于推广应用，而且由于所生成的染料均有较高的摩尔消光系数，因此灵敏度高、精确度好。

主权项

1.一种酶循环扩增法(Enzymatic Recycling Method)的5’-核苷酸酶活性浓度测定方法，其方法原理如下：腺苷单磷酸+水 5’-核苷酸酶 腺苷+单磷酸盐腺苷+水 腺苷脱氨酶 肌苷+氨离子氨离子+α-酮戊二酸+还原型辅酶 谷氨酸脱氢酶 谷氨酸 +辅酶+水谷氨酸+水+氧 谷氨酸氧化酶 氨离子+α-酮戊二酸+ 过氧化氢过氧化氢+还原型色原体组合 过氧化物酶 吲嗒胺色原或 醌亚胺色原+水将最终反应物置于可见光分析仪下，检测400-700nm处直接反映吲嗒胺色原或醌亚胺色原含量高低的光吸收速度，得出5’-核苷酸酶活性浓度大小测定结果。腺苷脱氨酶(Adenosine Deiminase EC 3.5.4.4)作为作用酶，功能为产生氨。谷氨酸脱氢酶(glutamate dehydrogenase EC 1.4.1.2、EC 1.4.1.3或EC 1.4.1.4)、谷氨酸氧化酶(Glutamate oxidase EC 1.4.3.7、EC1.4.3.11)作为循环酶，将氨不断地被重复循环利用，并同时不断地扩增产生过氧化氢。过氧化物酶作为显色酶，将过氧化氢与还原型色原体组合作用发生显色反应。