[发明专利]一种制备裸子植物花粉管全蛋白双向电泳样品的方法无效
| 申请号： | 200610089309.8 | 申请日： | 2006-06-16 |
| 公开（公告）号： | CN1872871A | 公开（公告）日： | 2006-12-06 |
| 发明（设计）人： | 林金星;陈彤;吴小琴;陈艳梅;汪小雄 | 申请（专利权）人： | 中国科学院植物研究所 |
| 主分类号： | C07K1/26 | 分类号： | C07K1/26;C07K2/00 |
| 代理公司： | 北京纪凯知识产权代理有限公司 | 代理人： | 关畅;任凤华 |
| 地址： | 100093北京市海*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种制备裸子植物花粉管全蛋白双向电泳样品的方法。该方法包括以下步骤：1)将裸子植物花粉管粉末悬浮于三氯乙酸溶液中，于－20～－4℃下放置；离心后收集沉淀，将该沉淀重悬于丙酮中，－20℃放置2－16小时，离心后收集沉淀，再用80％丙酮溶液洗涤，除去丙酮后得到裸子植物花粉管全蛋白粗提物；2)将步骤1)得到的裸子植物花粉管全蛋白粗提物溶解于裂解缓冲液后，离心取上清得到裸子植物花粉管全蛋白双向电泳样品液。本发明的分离制备裸子植物花粉管全蛋白用于双向电泳的方法快速、简单易行，可获得较高质量而且重复性较好的双向电泳图谱，便于后续的生物质谱分析鉴定蛋白，具有较大的实际应用价值。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 制备 裸子植物 花粉管 蛋白 双向 电泳 样品 方法 | ||
【主权项】：
1、一种制备裸子植物花粉管全蛋白双向电泳样品的方法，包括以下步骤：1)将裸子植物花粉管粉末悬浮于0.1-0.125g/mL三氯乙酸溶液中，于-20--4℃下放置1-2小时；离心后收集沉淀，将该沉淀重悬于含有体积百分含量为0.05-0.07％的巯基乙醇的丙酮溶液中，-20--4℃放置2-16小时，离心后收集沉淀，再用含有体积百分含量为0.05-0.07％的巯基乙醇和体积百分含量为70-80％的丙酮的溶液洗涤，除去丙酮后得到裸子植物花粉管全蛋白粗提物；2)将步骤1)得到的裸子植物花粉管全蛋白粗提物溶解于裂解缓冲液后，离心取上清得到裸子植物花粉管全蛋白双向电泳样品液；所述裂解缓冲液为含有5-7mol/L尿素，1-2mol/L硫脲，0.01-0.02g/mL CHAPS，体积百分含量为1-2％、pH为3.5-10的两性电解质、质量百分含量为0.6-1％的二硫苏糖醇、25-50μg/mL苯甲基磺酰氟的溶液。
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