[发明专利]肌肽类似物制备方法

摘要

一种肌肽类似物制备方法，属于医药抗氧化活性物质制备技术领域。本发明利用酶为催化剂，在催化反应过程中，不进行基团保护、也不使用缩合剂，因此制备工艺简单、反应条件温和、操作简便、充分利用资源、无环境污染、生产成本低、便于工业化生产。采用本发明制备出的肌肽类似物的纯度高达93.5～95.5％、质量好、抗氧化作用强，可广泛用作医药、食品、保健品、化妆品、饲料等的抗氧化活性物质。

主权项

1.一种肌肽类似物制备方法，其特征在于其具体的方法步骤如下：(1)制备合成肌肽类似物溶剂在四氢呋喃溶液中，加入pH值为8.5～9.0的浓度为0.1mol/L的磷酸缓冲溶液，磷酸缓冲溶液∶四氢呋喃溶液的的体积比为1∶1000～1250，搅拌均匀；(2)制备合成肌肽类似物的底物溶液按照4，5二羧酸咪唑∶L-丙氨酸的摩尔比为1∶3～3.5的比例，将4，5二羧基酸咪唑与L-丙氨酸混合并搅拌均匀后，再按照4，5二羧基酸咪唑和L-丙氨酸总重量∶蒸馏水体积为1∶1～1.5的比例，加入蒸馏水并进行搅拌溶解；(3)制备合成肌肽类似物反应液在(1)、(2)步完成后，按照α-胰凝乳蛋白酶粉质量：第(1)步制备合成肌肽类似物溶剂∶第(2)步制备的合成肌肽类似物的底物溶液体积比为1∶32.5～100∶0.04～0.06的比例，先在第(1)步制备合成肌肽类似物的溶剂中，加入第(2)步制备的合成肌肽类似物的底物溶液，搅拌混合均匀后，再置于夹层反应器中，并给反应器缓慢加热或在夹层中通入恒温水，待反应器中混合液的温度升至40～60℃时，再加入α-胰凝乳蛋白酶粉，在转速为200～400r/min下，搅拌反应1～2h，就制备出4-丙氨酰胺，5-羧酸咪唑产率为63.4～72.5％肌肽类似物的反应液；(4)分离沉淀在第(3)步反应完成后，将肌肽类似物反应液置于离心装置中，以3000～5000r/min的速度，进行离心分离10～20min，提取上层清液，然后按照上层清液∶无水乙醇的体积比为1∶1～2的比例，在上层清液中，加入无水乙醇，经搅拌均匀后，静止10～20min，然后过滤，分别收集滤渣和四氢呋喃-乙醇滤液；再生乙醇及四氢呋喃(5)将第(4)步收集的四氢呋喃-乙醇滤液，置于真空浓缩器中，在温度为70～90℃、及真空度为-0.8～-0.01MPa的条件下，进行真空浓缩，回收乙醇，然后在回收乙醇后的四氢呋喃溶液中，加入4A分子筛，4A分子筛的加入重量为四氢呋喃溶液体积的2～5％，经搅拌处理2～3h后，再进行过滤，分别收集四氢呋喃滤液和4A分子筛滤渣，对收集的4A分子筛滤渣，进行高温处理；(6)进行树脂交换处理将第(4)步收集的滤渣，用20～30倍的蒸馏水溶解，然后按照滤渣∶阳离子交换树脂的重量比为1∶10～15的比例，在滤渣溶液中，加入001×7或001×4阳离子交换树脂，进行搅拌交换30～60min，然后进行过滤，弃滤液，收集树脂滤渣；(7)制备肌肽类似物冻干粉将第(6)步收集的树脂滤渣，用蒸馏水洗涤2～3次后，再过滤，弃滤液，收集树脂滤渣，然后将树脂滤渣置入交换柱中，用0.1～0.2mol/L的HCL洗脱，在洗脱过程中，其洗脱液的流速为每小时3～5倍阳离子树脂重量，并用紫外检测器于310nm检测流出的洗脱液，用分部吸收器，收集310nm出现特征吸收峰的洗脱液，然后将该洗脱液置于截留分子量为100Da的透析袋中，用水透析5～7h，最后置于真空浓缩器中，在温度为80～90℃、真空度为-0.8～-0.01MPa条件下，减压浓缩至原体积的1/10～1/5，再用冻干设备，在温度为-50～-60℃、压力为25～50pa条件下，进行冷冻干燥成肌肽类似物4-丙氨酰胺-5-羧酸咪唑含量为93.5～95.5％的肌肽类似物冻干粉。