[发明专利]一种含基底膜结构的双层组织工程皮肤制备方法

摘要

一种含基底膜结构的双层组织工程皮肤制备方法，它由组织工程皮肤培养基配制、凝胶溶液制备、孵箱培养和筛网支架培养四步过程组成；系采用调节培养基中钙浓度和添加外源性层粘蛋白，来促进真表皮间基底膜结构形成的设计理念，使组织工程皮肤表皮与真皮间的连接得以增强，对维持表真皮的完整性起了重要作用。它具有以下优点：一是方法简便，所有材料均为液体形式，便于产品的合成和生产线操作；二是所采用的任何材料均具有良好的生物安全性和生物相容性，对于移植个体不会产生危害；三是获得的产品便于临床操作，表皮不易分离；四是产品的一致性和同质性好。

主权项

1、一种含基底膜结构的双层组织工程皮肤制备方法，其特征在于：1)它由组织工程皮肤培养基配制、凝胶溶液制备、孵箱培养和筛网支架培养四步过程组成；2)组织工程皮肤培养基配制是在DMEM培养基中加入浓度为6M的氯化钙溶液，调节钙离子浓度至0.30～2.15mM；再加入浓度为200μg/ml的层粘蛋白溶液，调节层粘蛋白浓度至1～100μg/ml；3)凝胶溶液制备是将醋酸胶原、壳多糖、透明质酸和弹性蛋白按16∶2∶1∶1的重量份配比混匀，然后用1N氢氧化钠调节pH值至7.2～7.4；4)孵箱培养是在制备的凝胶溶液中加入成纤维细胞(1～100)×105/20ml，混匀；吸入培养皿中，静置15分钟，再轻轻加入角质形成细胞混悬液，(1～100)×105/20ml凝胶，最后再加入配制的组织工程皮肤培养基8ml，置37℃、5％CO2/95％空气、90％以上湿度孵箱内培养，每天更换培养基一次，8ml/次，至少培养3天；5)筛网支架培养是将孵箱培养的组织工程皮肤移行至≥3mm高的不锈钢筛网支架上，使组织工程皮肤的表面暴露于空气中，进行气-液界面培养；每日观察培养物的外观、透光度、表皮细胞生长情况，15天后结束培养，获得成熟的含基底膜结构的双层组织工程皮肤产品。