[发明专利]一种从孕妇血浆中检测胎儿父系DNA点突变的方法

摘要

一种从孕妇血浆中检测胎儿父系DNA点突变的方法，它是依次通过样品处理、空隙－连接酶链反应识别点突变、荧光定量PCR检测连接产物的三个步骤，来实现从孕妇血浆中检测胎儿父系DNA点突变的目的。本发明具有方法可靠、灵敏度高等优点，可以准确地从孕妇血浆中检测出胎儿父系DNA中的点突变。

主权项

1.一种从孕妇血浆中检测胎儿父系DNA点突变的方法，其步骤如下：(1)、样品处理：抽取孕妇外周血，离心分离出血浆，从血浆中提取DNA；(2)、空隙-连接酶链反应(Gap-LCR)：将步骤(1)中的DNA作为模板，进行空隙-连接酶链反应(Gap-LCR)，其中，作为Gap-LCR引物的四个寡核苷酸片段p1、p2、p3、p4中，引物p1、p3与一条DNA链结合，引物p2、p4与另一条DNA链结合，且引物p1、p3具有如下特征：引物p1：引物p1是上游引物，它的5′端设置有一段与人DNA同源性低的DNA序列，以作为荧光定量PCR的识别序列；引物p3：引物p3是下游引物，它的3′端设置有一段与人DNA同源性低的且与引物p1设置的DNA序列相异的DNA序列，以作为荧光定量PCR的识别序列；空隙-连接酶链反应(Gap-LCR)后，若模板中存在要检测的突变位点，将产生连接产物，并且其中有一种是由引物p1和p3形成的新链；(3)、荧光定量PCR检测连接产物：取步骤(2)得到的产物1～5μl，以引物p1和p3形成的新链为模板，利用荧光定量PCR技术进行检测，以识别引物p1和p3形成的新链两端的序列，达到检测点突变的目的。