[发明专利]稻瘟病菌无毒基因的分子标记方法

摘要

本发明稻瘟病菌无毒基因的分子标记方法属于农业生物技术范畴。分子标记技术，对稻瘟病菌两亲本菌株及杂交后代群体鉴定获得的无毒基因进行分子标记。第1染色体端粒附近的SSR标记m355－356与无毒基因Avr－Pit连锁，遗传距离为2.3cM；定位于第7染色体端粒附近的RAPD标记S487与无毒基因Avr－Pia连锁，遗传距离为3.5cM；第3染色体的中部的SSR标记m677－678、RAPD标记S361与稻瘟病菌种特异性无毒基因PRE1连锁，遗传距离分别为5.9cM和6.4cM。本发明不仅可利用该无毒基因的标记作探针，而且为进一步通过物理作图法克隆该无毒基因奠定了基础。

主权项

1、稻瘟病菌无毒基因的分子标记方法，其特征在于：用标记引物ms355-356，左端引物序列AACCCTCCGTGCACCTTAG右端引物序列GCTTCTTCTCGCTTGCTGTT扩增稻瘟病菌DNA，如果能扩增出292bp的扩增片段，则标志着稻瘟病菌无毒基因Avr-Pit的存在，该无毒基因位于第1染色体端粒附近，利用软件Mapmaker3.0，最小LOD值设为3，获得与标记的遗传距离为2.3cM；或者用标记引物S487F/R，左端引物序列TGGTATTGTTCGCGTTGATATG右端引物序列CCCCGATGGTCTAATATACG扩增稻瘟病菌DNA，如果能扩增出306bp的扩增片段，则标志着稻瘟病菌无毒基因Avr-Pia的存在，该无毒基因位于第7染色体端粒附近，利用软件Mapmaker3.0，最小LOD值设为3，获得与标记的遗传距离为3.5cM；或者用标记引物ms363-364，左端引物序列TCTCGGGAAGCTGATTGAGT右端引物序列CTAACGGCCGGCTAACAAAC扩增稻瘟病菌DNA，如果能扩增出285bp的扩增片段，则标志着稻瘟病菌无毒基因Avr-Pia的存在，该无毒基因位于第7染色体端粒附近，利用软件Mapmaker3.0，最小LOD值设为3，获得与标记的遗传距离为4.6cM；或者用标记引物ms677-678，左端引物序列TCGTGAGGGTTCCTATCTGC右端引物序列GACCTTTATCGGATGCGTGT扩增稻瘟病菌DNA，如果能扩增出255bp的扩增片段，则标志着稻瘟病菌种特异性无毒基因PRE1的存在，该无毒基因位于第3染色体中部，利用软件Mapmaker3.0，最小LOD值设为3，获得与标记的遗传距离为5.9cM；