[发明专利]一种苦荞麦抗肿瘤蛋白的制备方法

摘要

一种苦荞麦抗肿瘤蛋白的制备方法，属于苦荞麦精深加工技术领域。本发明以苦荞麦粉为原料，采用硫酸铵分级沉淀、离子交换色谱和凝胶过滤色谱对苦荞麦水溶性蛋白质(TBWSP)中抗肿瘤活性组分进行筛选、分离及纯化，得到了具有抗肿瘤活性的有效组分TBWSP31。本发明方法设计科学合理，所得组分TBWSP31对人乳腺癌细胞株Bcap37的生长有显著的增殖抑制活性，IC₅₀值为19.75μg/mL，为苦荞麦的综合利用和深度开发提供理论依据和应用价值。

主权项

1、一种苦荞麦抗肿瘤蛋白的制备方法，其特征在于：以苦荞麦粉为原料，加缓冲液进行搅拌提取，离心分离，收集上清液，加硫酸铵分级沉淀，离心分离，收集沉淀，复溶，透析，冷冻干燥得到苦荞麦水溶性蛋白质TBWSP；TBWSP溶解于缓冲液中上DEAE-Sepharose FF离子交换层析柱，分离得到抗肿瘤活性组分TBWSP3；TBWSP3溶解于缓冲液中上Sephadex G-100凝胶过滤层析柱，得到抗肿瘤活性的有效组分TBWSP31，工艺为：(1)苦荞麦水溶性蛋白质TBWSP的制备：苦荞麦粉加入到pH7.2，10mmol/L磷酸盐缓冲液中，苦荞麦粉与缓冲液的质量/体积比为1∶10，室温下搅拌提取2h，然后4℃、10000转/分钟离心20分钟，收集上清液，上清液中加入固体硫酸铵，至饱和度为70％～90％，再搅拌20分钟，然后4℃、10000转/分钟离心20分钟，弃去上清液收集沉淀，沉淀加少量水复溶，然后将其装入透析袋中，置于4℃去离子水中透析48h，浓缩后冷冻干燥，制得TBWSP；(2)DEAE-Sepharose FF离子交换层析：苦荞麦水溶性蛋白冷冻干燥样品TBWSP溶解于pH7.2、10mmol/L磷酸盐缓冲液中，TBWSP的浓度为5～10mg/mL，3000转/分钟离心10分钟，取上清液加入到DEAE-Sepharose FF离子交换柱中，依次用pH7.2、10mmol/L磷酸盐缓冲液、含0.2mol/L NaCl的磷酸盐缓冲液和含0.5mol/L NaCl的磷酸盐缓冲液为洗脱剂进行洗脱，分别收集峰组分，用280nm紫外检测法逐管检测，命名为：TBWSP1、TBWSP2和TBWSP3，蒸馏水透析脱盐，冷冻干燥，分离得到抗肿瘤活性组分TBWSP3；(3)ephadex G-100凝胶过滤层析：TBWSP3溶解于pH7.2、10mmol/L磷酸盐缓冲液中，TBWSP3的浓度为10～15mg/mL，3000转/分钟离心10分钟，取上清液加入到ephadex G-100凝胶过滤柱中，然后用pH7.2、10mmol/L磷酸盐缓冲液进行洗脱，收集峰组分，用280nm紫外检测法逐管检测，命名为：TBWSP31、TBWSP32和TBWSP33，蒸馏水透析脱盐，冷冻干燥，纯化得到抗肿瘤活性组分TBWSP31。