[发明专利]一种高效快速微藻藻红蛋白分离纯化方法

摘要

本发明涉及一种采用超声波破碎、硫酸铵分级沉淀和强阴离子交换柱层析分离纯化微藻藻红蛋白的方法。首先将冻干藻粉及藻泥按1∶20～25加蒸馏水进行溶解，用超声波破碎、高速冷冻离心，得藻红蛋白粗提液。加入固体硫酸铵至一定的饱和度时进行分级沉淀，磷酸钠缓冲液平衡透析，离心20min后，采用强阴离子Capto^TMQ柱层析交换柱层析将上清液一步纯化，得到藻红蛋白。本发明通过硫酸铵分级沉淀、强阴离子交换柱层析一步纯化得到藻红蛋白，其纯度达到OD₅₄₅/OD₂₈₀＝5.70，具有纯化效果好、上样量大、样品得率高等特点，所分离得藻红蛋白纯度达到5.70，总收率63％，聚丙烯酰胺凝胶电泳显示一条带。

主权项

1、一种采用硫酸铵分级沉淀和离子交换层析分离微藻藻红蛋白的方法，其特征是：I、藻粉加蒸馏水用超声波破碎细胞，破碎后用高速冷冻离心机4℃、6000r/min离心20min，离心分离上清液，沉淀的藻泥加蒸馏水用超声波再行破碎2次，合并上述破碎后所得全部上清液即为藻红蛋白粗提液；II、藻红蛋白粗提液加入饱和度分别为20％、35％、50％、65％和80％固体硫酸铵，过夜、进行离心沉淀，取沉淀溶于少量蒸馏水装入透析袋中蒸馏水透析，磷酸钠缓冲液平衡透析，将透析后的样品离心，取上清液即为上样样品；III、将样品上样于平衡好的强阴离子交换剂CaptoTM Q离子交换柱柱顶，用0.01mol/L-0.02mol/L缓冲液洗柱直至280nm处吸收峰回到基线，用1.0～2.0mol/L NaCl进行梯度洗脱，流速1.5mL/min。