[发明专利]一种中华稻蝗成虫抗菌蛋白的制取方法

摘要

本发明属用生物学方法制取抗菌蛋白及其组份提纯的技术领域，特别涉及一种中华稻蝗成虫抗菌蛋白的制取方法。本发明的抗菌蛋白以中华稻蝗成虫为原料，通过将中华稻蝗成虫提取液经离心、沉淀、分子筛层析、高压液相层析分析、超滤处理、浓缩、收集活力成分等步骤，最后制得。本发明具有原材料中华稻蝗来源广泛、制取方法简单、回收率高等优点。

主权项

1、一种中华稻蝗成虫抗菌蛋白的制取方法，其步骤为：1)、采回的中华稻蝗成虫在室内饲养5～10天后，将其去头、足及翅；2)、置于研钵中加入5～15倍体积预冷的pH 6.0～7.0，0.01～0.1mol/L缓冲液，同时加入酶抑制剂于-4℃～20℃温度下研磨，得提取液；3)、将提取液进行4000～20000r/min的离心过程，时间5～30min，收集上清液，于沸水浴中边加热边搅拌5～15min；4)、将搅拌液进行4000～20000r/min的离心过程，时间5～30min，再次收集上清液；5)、将再次收集的上清液浓缩，即得中华稻蝗成虫抗菌蛋白粗提液；6)、粗提液上Sephadex凝胶柱层析，洗脱条件为pH 6.0～7.0，0.01～0.1mol/L缓冲液，收集活力峰，并浓缩；7)、将经Sephadex凝胶色谱半纯化的中华稻蝗成虫抗菌蛋白依次装入截流分子量为10KDa、5KDa、3KDa的超滤离心管，在4000～12000r/min条件下离心30min，将纯化物分为4部分，即分子量高于10KDa的组分；分子量介于5～10KDa的组分；分子量介于3～5KDa的组分；分子量低于3KDa的组分；8)、收集3～5KDa的组分，即为中华稻蝗成虫抗菌蛋白。