[发明专利]一种凝血酶的提取分离方法

摘要

本发明涉及生物工程技术领域，更具体地说涉及一种凝血酶的提取分离方法。本发明是采用CaCl₂激活凝血酶原成为凝血酶的同时加入(NH₄)₂SO₄，使其生成CaSO₄沉淀吸附凝血酶，以简化其生产工艺流程，缩短后续纯化的周期和降低成本。本发明提取方法简便易行，易于工业化生产，不通过离子交换层析和亲和层析等复杂步骤，而直接经过洗脱，超滤和冻干步骤，这样节省了成本和提取时间，由原来约需的7天时间缩短到2～3天。每立升血液可获得冻干凝血酶粉0.7g左右，其比活力约为100U/mg(蛋白)。

主权项

1、一种凝血酶的提取分离方法，该方法有下述顺序的步骤：a、以成牛血液或猪血液为原料，在此血液中加入3.8％的柠檬酸钠(W/V)作为抗凝剂，搅拌均匀，然后用4000转/分钟，离心20分钟，获得血浆；b、将获得的血浆用去离子水稀释9～10倍(V/V)，用2mol/L醋酸调节pH值为5.30，在4～5℃下，静置10～12小时，再用4000转/分钟，离心20分钟，沉降后弃去上清液，获得凝血酶原沉淀；c、将获得的凝血酶原沉淀，用含1.5％～2.0％CaCl2(W/V)的去离子水溶介凝血酶原，在4～5℃下放置1.5小时，然后用4000转/分钟，离心20分钟，沉降后弃去沉淀物，获得上清液；d、将获得的上清液放在37℃水浴中搅拌，按体积加入10～15％(NH4)2SO4 (W/V)，生成CaSO4沉淀吸附溶液中的凝血酶，静置30分钟，用4000转/分钟，离心20分钟，沉降后弃去上清液，收集沉淀物；e、将收集的沉淀物用pH值为7.30的0.9％生理盐水(W/V)洗脱，然后用4000转/分钟，离心20分钟，沉降后弃去沉淀物获得凝血酶溶液；f、将获得的凝血酶溶液用超滤器对其进行浓缩，冷冻干燥，获得白色的凝血酶冻干粉。