[发明专利]大肠杆菌菌体多克隆抗体及其制备方法与应用

摘要

本发明公开了一种大肠杆菌菌体多克隆抗体及其制备方法与应用。该制备方法包括以下步骤：1)分离大肠杆菌；2)将大肠杆菌置于含无菌玻璃珠和/或钢珠的生理盐水中，摇动，在80－120℃下孵育1.5－3小时，离心，弃上清，用PBS重悬后对其进行灭菌，得到大肠杆菌菌体抗原；3)将大肠杆菌菌体抗原免疫动物；4)从经免疫的动物中分离、纯化抗血清，得到大肠杆菌菌体多克隆抗体。用本发明方法制备的大肠杆菌菌体多克隆抗体具有特异性高，纯度及效价高(大于6400)，可长期保存的优点，将其用于环境及食品检测领域中大肠杆菌的免疫检测中，将具有精确性、灵敏度高和检测步骤少的优势，应用前景广阔。

主权项

1、一种大肠杆菌菌体多克隆抗体的制备方法，包括以下步骤：1)分离大肠杆菌，具体方法为：先将样品接种于牛肉膏蛋白胨琼脂培养基上在36-38℃下培养12-36小时，再将在牛肉膏蛋白胨固体培养基长出的菌落涂布于品红亚硫酸钠培养基上在36-38℃下培养24-48小时，接着挑取在品红亚硫酸钠培养基上长出的紫红色带金属光泽的单菌落，再次接种于品红亚硫酸钠培养基上在36-38℃下培养24-48小时，然后挑取紫红色带金属光泽的单菌落，接种于添加了质量百分浓度为1.4-1.8％溴甲酚紫的乳糖蛋白胨培养基中在36-38℃下培养12-36小时，待乳糖蛋白胨培养基中的紫色褪去，将菌液接种于牛肉膏蛋白胨琼脂培养基上，对长出的菌落进行革兰氏染色，观察细菌形态，将鉴定为大肠杆菌的菌落再接种于伊红美蓝培养基上在36-38℃下培养12-36小时，菌落呈黑紫色的为大肠杆菌；2)将大肠杆菌培养后置于含无菌玻璃珠和/或钢珠的生理盐水中，摇动，然后在80-120℃下孵育1.5-3小时，离心，弃上清，洗涤，再离心，弃上清，将菌体沉淀用PBS重悬后对其进行灭菌，得到大肠杆菌菌体抗原；3)将大肠杆菌菌体抗原免疫动物；4)从经免疫的动物中分离、纯化抗血清，得到大肠杆菌菌体多克隆抗体。