[发明专利]一种筛选结核杆菌耐多药蛋白的方法

摘要

本发明属于分子生物学筛选新型抗结核药靶、疫苗抗原和检测新标志物领域，具体的说，本发明提供了一种筛选结核杆菌耐利福平药物的蛋白的方法：首先，培养耐多药菌株；其次，分别分离耐多药菌株和敏感菌株中的蛋白；再次，将耐多药菌株和敏感菌株中的蛋白进行对比，确定耐多药蛋白；最后，分离鉴定耐多药蛋白。本发明提供的方法可以准确分离鉴定结核杆菌耐多药蛋白，为深入了解结核杆菌的耐多药机理、临床耐多药株的快速检测及疫苗、药靶的开发提供新的途径。

主权项

1.一种筛选结核杆菌耐多药蛋白的方法，其特征在于，所述药物是3-{[(4-甲基-1-哌嗪基)亚氨基]甲基}-利福霉素、4-吡啶甲酰肼-异烟肼、{2R，2[S-(R*，R*)]-R}-(+)2，2′-(1，2-乙二基二亚氨基)-双-1-丁醇二盐酸盐-乙胺丁醇、0-2-甲氨基-2-脱氧-α-L-葡吡喃糖基-(1→2)-0-5-脱氧-3-C-甲酰基-α-L-来苏呋喃糖基-(1→4)-N1，N3-二脒基-D-链霉胺硫酸盐-链霉素和吡嗪甲酰胺-吡嗪酰胺；该方法包括以下步骤：(1)在临床结核杆菌分离株中筛选耐多药菌株，以对五种药物同时满足最低抑菌浓度高于相应临界耐药浓度的菌株为耐多药菌株；五种药物的临界耐药浓度分别为：3-{[(4-甲基-1-哌嗪基)亚氨基]甲基}-利福霉素为16μg/ml，4-吡啶甲酰肼-异烟肼为2μg/ml，{2R，2[S-(R*，R*)]-R}-(+)2，2′-(1，2-乙二基二亚氨基)-双-1-丁醇二盐酸盐-乙胺丁醇为4μg/ml，0-2-甲氨基-2-脱氧-α-L-葡吡喃糖基-(1→2)-0-5-脱氧-3-C-甲酰基-α-L-来苏呋喃糖基-(1→4)-N1，N3-二脒基-D-链霉胺硫酸盐-链霉素为8μg/ml，吡嗪甲酰胺-吡嗪酰胺为16μg/ml；以相同条件下不加药培养的结核杆菌标准实验株、临床敏感菌株为对照；(2)分别分离标准实验株、临床敏感菌株和耐多药菌株中的蛋白；(3)以耐多药菌株中，相对于标准实验株和临床敏感菌株，增加或者缺失的蛋白，或者表达量增加至少2倍的蛋白，或者表达量减少至少50％的蛋白为耐多药蛋白；(4)分离鉴定耐多药蛋白。