[发明专利]一种质粒DNA的提取方法及其提取装置

摘要

本发明公开了一种质粒DNA的提取方法及其提取装置，该方法包括如下步骤：工程菌的培养；工程菌的裂解；质粒的提取纯化。本发明采用了改良的TB培养基培养工程菌，提高了细菌和质粒的产量；本发明利用了价格便宜、常用的干酪包布和混合纤维素酯微孔滤膜代替了经典方法中的过滤的步骤，节约了成本和时间，而且产量和纯度比较高；本发明利用了50～60℃的双蒸水或TE溶解质粒，提高了产量及效率；本发明可满足不同规模的质粒提取要求，提取过程简单易行，而且质粒产量和质量都很好，可用于酶切、连接和转化，还可以满足核酸疫苗的生产。

主权项

1、一种质粒DNA的提取方法，其特征在于包括如下步骤：(1)工程菌的培养：将工程菌接种于改良TB液体培养基中，37℃、300转/分钟振荡培养12～14小时，得到对数晚期的培养物即OD值为0.6的培养物；所述接种体积百分比为0.5～1％；所述改良TB液体培养基为：将组分蛋白胨12g，酵母提取物24g，甘油4mL溶解在900mL水中，上述各组分溶解后高压灭菌，冷却到60℃，再加100mL经灭菌的170mmol/L KH2PO4和720mmol/LNa2HPO4的溶液；(2)工程菌的裂解：取步骤(1)中的培养物采用碱裂解法裂解工程菌；(3)质粒的提取纯化：裂解产物通过4～6层干酪包布进行过滤，收集滤液，加入RNA酶，使终浓度为20ug/mL，37℃作用20分钟，然后向滤液中加入0.6滤液体积的异丙醇，室温放置2分钟，沉淀质粒，然后用混合纤维素酯微孔滤膜过滤，弃去滤液，质粒留在膜上，用70％的乙醇冲洗混合纤维素酯微孔滤膜2～3次，风干滤膜，最后用50～60℃的双蒸水或pH8.0的TE溶解质粒DNA，即可得到质粒DNA。