[发明专利]重组植物防御素PD5的工程菌直至产物的制备方法

摘要

本发明涉及重组植物防御素PD5的工程菌直至产物的制备方法，属于基因工程技术领域，包括植物防御素PD5基因的扩增、基因克隆和大肠杆菌转化、毕赤酵母转化、工程菌产物高效表达及植物防御素PD5纯化。本发明产量高，纯化工艺简单，生产成本低。制得的重组植物防御素PD5，可用于农作物病害防治、食品水果保鲜、化妆品防腐及制作饲料添加剂、医药产品。

主权项

1、重组植物防御素PD5的工程菌直至产物的制备方法，其特征在于其操作步骤为：A、植物防御素PD5基因的扩增：在合成引物的存在下，以重组质粒PTG/PD5为模板，通过PCR基因扩增，获得植物防御素PD5基因DNA片段；B、基因克隆和大肠杆菌Top10转化：用限制性内切酶Xho I和EcoR I分别酶切扩增获得的基因DNA片段和表达载体pPIC9质粒，连接酶切产物并转化至大肠杆菌Top10感受态细胞，经抗性培养基筛选，获得含有重组表达载体pPIC-PD5的大肠杆菌Top10；C、毕赤酵母转化：从大肠杆菌Top10中抽提重组表达质粒pPIC-PD5质粒，分别用限制性内切酶Bg1II和Sa1I酶切该重组表达质粒pPIC-PD5，将酶切产物转化至毕赤酵母GS115和SMD1163的感受态细胞，经选择性培养基筛选，获得阳性克隆的毕赤酵母GS115和SMD1163，即重组植物防御素PD5工程菌；D、将工程菌扩大培养，诱导表达，植物防御素PD5纯化。