[发明专利]一种嗜冷谷胱甘肽还原酶及其制备方法

摘要

一种嗜冷谷胱甘肽还原酶及其制备方法，以南极微藻为材料，用硫酸铵沉淀、离子交换、亲和层析和凝胶过滤4步法对该酶进行分离纯化。该酶由2个相同的亚基构成，亚基的表观分子量为54.6kDa，最适温度为25℃，最适pH为7.5，最适Mg²⁺为7.5mmol/L，Ca²⁺、Mg²⁺对其具有促进作用。该酶可以作为低温酶催化机理研究的极好材料，可进一步阐明低温酶的催化机制；能为抗逆性新品种改良提供新的思路，本纯化方法可以进行该酶的规模化制备，并可以应用于其他低温谷胱甘肽酶的分离纯化；与其激活剂一起使用可以用于人类、水生生物等常见疾病的预防和辅助治疗。

主权项

1、一种嗜冷谷胱甘肽还原酶，其特征是：(1)由2个相同的亚基构成，亚基的表观分子量为54.6kDa；(2)动力学参数表观米氏常数Km还原辅酶II NADPH、Km氧化型谷胱甘肽GSSG、Km还原辅酶I NADH分别为23.3μmol/L、66.0μmol/L、83.8μmol/L；(3)最适pH为7.5，强碱性对其活性影响比较大；(4)最适温度为25℃，属于一种低温酶或嗜冷酶，在0℃还具有一定的活力；对高温具有不稳定性，与低温酶相同；活化能为3.7kJ/mol·K，-78℃保藏是最佳的保藏方法；(5)最适Mg2+为7.5mmol/L，Ca2+、Mg2+对其具有促进作用；(6)螯合剂乙二醇-双(2-氨基乙基)四乙酸EDTA等、重金属离子如Cd2+、pb2+、Cu2+、Zn2+等不同程度地抑制其活力。