[发明专利]一种鸡肠道β防御素的氨基酸序列与多核苷酸序列及提取方法

摘要

一种鸡肠道β－防御素cDNA，其特征在于：具有如下序列，TCAGACAGCC AGCTGTGCAG GAACAACCAT GGCCACTGCC GGAGGCTCTG CTTCCACATG GAGAGCTGGG CTGGGAGCTG CATGAACGGC CGCCTGCGCT GCTGCAGGTT CTCCACCAAG CAGCCCTTTT CCAACCCTAA ACATTCAGTG CTGCACACAG CAGAGCAGGA CCCTTCCCCA AGCCTTGGAG GGACGTGA。该β－防御素的氨基酸序列特征是：Ser－Asp－Ser－Gln－Leu Cys－Arg－Asn－Asn－His Gly－His－Cys－Arg－Arg Leu－Cys－Phe－His－Met Glu－Ser－Trp－Ala－Gly Ser－Cys－Met－Asn－Gly Arg－Leu－Arg－Cys－Cy sArg－Phe－Ser－Thr－Lys－Gln Pro－Phe－Ser－Asn－Pro Lys－His－Ser－Val－Leu His－Thr－Ala－Glu－Gln Asp－Pro－Ser－Pro－Ser Leu－Gly－Gly－Thr。其提取方法，包括以下步骤：A.收集破碎鸡肠道黏膜细胞，B.之后破碎小囊泡。C.5％乙酸搅拌浸提，离心，取上清，弃沉淀，上清液分装冻存，即为鸡肠道β－防御素粗提物。D.低温下将上清液上样于Sephadex G－100凝胶柱，用0.2mol/L乙酸钠洗脱，恒流泵的速度为3×1，经核酸蛋白检测仪检测后自动收集器收集，每管1.5mL，记录仪记录(速度为6cm/h，量程20mv)。E.通过琼脂糖弥散方法检测各收集管液体对巴氏杆菌的抗菌活性，收集有抑菌作用的洗脱液，真空冷冻干燥保存。F.有抑菌作用的洗脱液进行Tricine－PAGE纯化，蛋白条带电转印至PVDF膜，采用Sanger水解逐段分析法做氨基酸序列分析。G.BLAST软件推导鸡肠道β防御素cDNA序列。

主权项

1.一种鸡肠道β-防御素cDNA，其特征在于：具有如下序列，TCAGACAGCC AGCTGTGCAGGAACAACCAT GGCCACTGCC GGAGGCTCTG CTTCCACATG GAGAGCTGGG CTGGGAGCTG CATGAACGGCCGCCTGCGCT GCTGCAGGTT CTCCACCAAG CAGCCCTTTT CCAACCCTAA ACATTCAGTG CTGCACACAGCAGAGCAGGA CCCTTCCCCA AGCCTTGGAG GGACGTGA。