[发明专利]植物种子转化技术

摘要

本发明属于生物技术领域。外源DNA进入植物基因组，目前主要有愈伤组织的农杆菌介导和基因枪法等技术。但是，受再生体系难、遗传背景差异导致转化率低下等因素，它们仍然处在不断的完善之中。物理手段的使用(如超声波、负压法、脉冲电泳、重离子辐照和γ射线辐照等)也同样存在使用材料有限、转化率低等主要问题。其中与本发明相近的γ射线辐照，因为辐照材料为愈伤组织，要考虑到再生体系、辐照时期和污染等问题，实际操作受到了很大限制。因此面对许多类型植物的转化技术，还需要进一步的不断改进。本发明的主要内容与技术特征是：将在γ射线辐照后的植物种子(剂量为：0.01－10Gy，剂量率：为0.1－2Gy/h)，转入携带目的基因质粒的农杆菌或外源DNA(表达质粒)中悬浮液浸泡5－300min，然后，在选择性的基质中萌发；鉴定、筛选GUS基因瞬间表达的幼苗：利用阳性幼苗可以用作两种后续的处理：一是作为外植体，在选择培养基上进行组织培养获得转基因再生植株；二是将阳性幼苗直接移栽盆内或田间，但其后，要每各3－5天，在各株的所有茎尖处，点滴50－200μl的相关抗生素(浓度为50－250mg/l)，直至花芽的形成；收获种子进行外源基因鉴定，阳性材料进入下一代种植。

主权项

植物种子转化技术本发明专利的主要技术特征是：将在γ射线辐照后的植物种子(剂量为：0.01-10Gy，剂量率：为0.1-2Gy/h)，转入携带目的基因质粒的农杆菌或外源DNA(表达质粒)中浸泡5-300min，然后，在选择性基质中萌发；鉴定、筛选GUS基因瞬间表达的幼苗；利用阳性幼苗可以用作两种后续的处理：一是作为外植体，在选择培养基上进行组织培养获得转基因再生植株；二是将阳性幼苗直接移栽盆内或田间，但其后，要每各3-5天，在各株的所有茎尖处点滴50-200μl的相关抗生素(浓度为50-250mg/l)，直至花芽的形成；收获种子进行外源基因鉴定，阳性材料进入下一代种植。