[发明专利]一种新型检测急性心肌梗死变异生物标志的试剂盒和方法

摘要

本发明涉及一种通过被抗体组吸附表面基质上捕获的生物标志，用标准化质控血清控制下的定量性质谱分析来检测。在一个抗体组基质上同时捕获多个生物标志，并对捕获的变异的生物标志进行质谱精确分析。可以同时检测多个生物标志群。本发明的方法可用于检测已经脱离人体的体液中的生物标志组合。这些生物标志组合可以用于同时鉴别正常人及急性心肌梗死病人离体体液的试剂盒的检测方法。本发明检测急性心肌梗死试剂盒的灵敏度为100％，特异性为100％。本方法精确、方便且快捷。

主权项

1.一种用含有抗体组的基质去捕获急性心肌梗死生物标志的试剂盒制备和方法，其特征是采用质谱法对样品中已被抗体组捕获的生物标志进行精确地鉴别、检测的方法。该方法通过以下步骤实现：(1)样品处理及质谱标准化质控血清制备；(2)基质与多种抗体结合试剂盒制备、样品上样；(3)洗涤；(4)质谱的定量控制及质谱检测；其中所述步骤(1)将生物样品稀释在稀释缓冲溶液中。用O型血，男女相等，混合制备质谱的标准化质控血清；所述步骤(2)将质谱的标准化质控血清及样品点样在有支持物的基质中的一个位点上。支持物可用金属片、玻璃片、陶瓷片、陶瓷珠、磁性珠、多聚体、液相色谱柱子或Sepharose beads等。基质是任何能与抗体选择性或特异性结合的物质；所述步骤(3)用结合缓冲液洗涤。在样品完全干燥前将第一份洗涤溶液加到该位点。洗涤溶液在位点上至少停留10秒。彻底清除第一份洗涤溶液，用第二份洗涤液重复以上步骤。用水彻底洗涤整个阵列点，自然干燥基质及滞留的生物标志；或用三氟乙酸彻底洗涤整个阵列点(当用陶瓷珠、磁性珠、多聚体、液相色谱柱子或Sepharose beads为支持物时)，将生物标志洗脱至质谱专用金属片或位点上。所述步骤(4)加0.5μL吸能分子(以50％乙腈，0.5％三氟乙酸的制备的饱和标准溶液)用质谱仪去分析滞留与各位点的生物标志或用电喷雾电离已洗脱的生物标志后用质谱仪去分析。本发明用WCX阴离子基质磁珠及用C8/C18疏水基质磁珠对确诊为急性心肌梗死患者与正常人血清进行蛋白质对比分析，用计算机分析数据结果发现血清中质荷比，1263.6±1Da、1350.6±1Da、1449.8±1Da、1465.7±1Da、1777.9±1Da、1865.0±1Da、3778.7±10Da、4649.6±15Da、8149.8±15Da、42kDa中的10个蛋白质相对含量有明显的差异，并且10个蛋白质所组合成的分组标准检测急性心肌梗死试剂盒的灵敏度为100％，特异性为100％。