[发明专利]鉴别诊断禽流感感染鸡群的酶联免疫吸附试验方法

摘要

一种鉴别诊断禽流感感染鸡群的酶联免疫吸附试验方法，属于生物工程技术领域。本发明首先将H9N2型禽流感病毒进行扩增，获得目的片断，将该片断与载体连接，得到重组表达质粒，导入大肠杆菌表达，获得一个融合蛋白；该融合蛋白经过纯化，得到H9N2型禽流感病毒NS1蛋白，将该蛋白作为抗原包被酶标反应板，建立酶联免疫吸附试验方法测定待检血清中与抗原反应的抗体水平，通过统计学分析确定酶联免疫吸附试验阴阳性判定的临界值、最少的检测样本数；最后根据鸡群样本的酶联免疫吸附试验平均OD值大小，从群体水平鉴别诊断鸡群是否被禽流感野毒感染。本发明方法从总体鉴别诊断，降低了非特异性反应，为及时诊断、预防禽流感提供科学依据。

主权项

1、一种鉴别诊断禽流感感染鸡群的酶联免疫吸附试验方法，其特征在于，所述方法具体步骤包括：①通过反转录聚合酶链式反应扩增H9N2型禽流感病毒NS1蛋白的基因；②将步骤①扩增所得H9N2型禽流感病毒NS1蛋白的基因通过酶切插入到载体质粒pET-32a(+)中，构建出原核表达质粒，将构建好的质粒转入大肠杆菌BL21中，异丙基巯基半乳糖苷诱导表达，表达产物经聚丙烯酰胺凝胶电泳和蛋白质免疫印迹实验鉴定为融合蛋白；③将步骤②所得融合蛋白作为抗原包被酶标反应板，建立酶联免疫吸附试验的方法，确定反应条件；④按照步骤③建立的酶联免疫吸附试验的方法，对禽流感H9N2感染组鸡血清、30日龄非免疫鸡的阴性血清、禽流感H9N2灭活疫苗接种组鸡血清进行检测；⑤按照统计学方法对检测结果进行分析，确定禽流感血清的酶联免疫吸附试验阴阳性判定的临界值和最少样本数；⑥根据血清样本酶联免疫吸附试验阴阳性判定的临界值和规定的最少检测样本数，按照鸡群血清样本的酶联免疫吸附试验平均吸光度的大小，平均吸光度高于临界值的确定为鸡群感染了禽流感野毒。