[发明专利]家蚕重组杆状病毒感染的方法无效

专利信息
申请号: 200610155054.0 申请日: 2006-12-07
公开(公告)号: CN1974776A 公开(公告)日: 2007-06-06
发明(设计)人: 姚慧鹏;吴小锋;兰丽盼 申请(专利权)人: 浙江大学
主分类号: C12N15/88 分类号: C12N15/88;C12N15/33
代理公司: 杭州求是专利事务所有限公司 代理人: 林怀禹
地址: 310027浙*** 国省代码: 浙江;33
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摘要: 发明公开了一种家蚕重组杆状病毒感染的方法。利用应用脂质体介导技术经皮接种家蚕,达到了直接用病毒感染同样的感染效果。这种新的感染方法其优点在于改变了传统直接使用病毒的接种方式,避免了病毒可能扩散后引起作业环境污染的潜在危险性,提高了昆虫杆状病毒表达系统生物安全性。
搜索关键词: 家蚕 重组 杆状 病毒感染 方法
【主权项】:
1、一种家蚕重组杆状病毒感染的方法,其特征在于:(1)病毒基因组DNA的提取制备:用重组家蚕杆状病毒HyNPV-bFGF感染昆虫培养细胞Sf21,96h后低速离心收集细胞,加入PBS缓冲液悬浮后再离心1次;用STRATAGENE公司DNA Extraction Kit抽提病毒基因组,对RNA消化后用A260/280测定病毒基因组DNA纯度和浓度;(2)DNA与脂质体的混合:根据一定的浓度混合比例,脂质体的浓度确定在0.1g/L,病毒DNA浓度5ng/L,使用前室温放置30分钟;(3)重组病毒经皮感染:经皮穿刺接种用注射的方式,事先将五龄家蚕幼虫放置冰上10分钟,然后将含有病毒液或其DNA的混合液的针头平行插入昆虫家蚕腹部节间膜处,轻推针筒注射,注意不伤内部器官,每头家蚕注射量为20L;接种后30分钟给予桑叶饲养;(4)感染效果测定:72小时后取家蚕少量血液置于载玻片上,在显微镜下观察是否有病毒粒子,如果有说明已感染;并于96小时后观察发病症状。
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