[发明专利]一种结核快速诊断的质谱分析试剂盒和方法

摘要

本发明涉及一种用磁珠支持基质的方法捕获生物样品中结核病蛋白质组，用磁性分离器分离磁珠及样品，无需离心样品。然后用质谱法进行分析的蛋白指纹法。本试剂盒依据几个特征蛋白峰，双盲测试正常人与结核病的敏感性100％，特异性100％。其中变异的血清淀粉样蛋白A可用于检测正常人、轻度结核病人、复发结核病人、重度结核病人、结核病人有效治疗后离体的血清。变异的血清淀粉样蛋白A升高者提示疗效差、重度结核及结核复发。所以它是一个早期发现结核恶化、预测结核复发发生的早期预警蛋白指纹组。本发明的方法可用于区别正常人与结核病的蛋白指纹或质谱图谱的试剂盒。本方法准确、方便且快捷。

主权项

1.一种用磁珠支持基质的方法捕获生物样品中结核病蛋白质组的试剂盒和方法，其特征是采用蛋白指纹法对结核病中蛋白质组或质谱图谱进行鉴别检测。用标准化质控血清(浆)控制下的定量性质谱分析来检测。该方法通过以下步骤实现：(1)样品处理及质谱标准化质控血清(浆)制备；(2)基质与血清(浆)结合试剂盒制备、样品上样；(3)洗涤；(4)质谱的定量控制及质谱检测；其中所述步骤(1)将生物样品稀释在稀释缓冲溶液中。用O型血，男女相等，混合制备质谱的标准化质控血清(浆)；所述步骤(2)将质谱的标准化质控血清(浆)及样品点样在有支持物的基质中的一个位点上。支持物用磁性珠。基质是用WCX阴离子基质及C8/C18疏水基质与血清(浆)选择性结合；所述步骤(3)用结合缓冲液洗涤。在样品完全干燥前将第一份洗涤溶液加到该位点。洗涤溶液在位点上至少停留10秒。彻底清除第一份洗涤溶液，用第二份洗涤液重复以上步骤。用三氟乙酸彻底洗涤整个阵列点，将生物标志洗脱至质谱专用金属片或位点上。所述步骤(4)加0.5μL吸能分子(以50％乙腈，0.5％三氟乙酸的制备的饱和标准溶液)用质谱仪去分析滞留与各位点的生物标志或用电喷雾电离已洗脱的生物标志后用质谱仪去分析。对血液进行蛋白质对比分析，用计算机分析血液中质荷比数据。本试剂盒依据几个特征蛋白峰2873.3±15 Da、3379.7±15 Da、3449.3±15 Da、5808.4±15 Da、7568.9±15 Da、8048.7±15 Da、11439.2±15 Da、11526.7±15 Da、11683.0±15 Da、15114.9±15 Da、15312.8±15 Da，双盲测试正常人与结核病的敏感性100％，特异性100％。定量性控制及质谱激光能量调控：每次测试前，用质谱的标准化质控血清(浆)，将标准化质控血清(浆)中用于定量的标准峰6634±1 Da强度调至50％质谱信号强度的最大值。用2746±1 Da、5909±1 Da、6634±1 Da标准峰为质谱定性(分子量)质控标准。