[发明专利]一种细菌荚膜多糖蛋白结合物中游离蛋白含量的测定方法无效
| 申请号： | 200610163866.X | 申请日： | 2006-12-30 |
| 公开（公告）号： | CN101000351A | 公开（公告）日： | 2007-07-18 |
| 发明（设计）人： | 黄镇;向左云;吴凯 | 申请（专利权）人： | 云南沃森生物技术有限公司 |
| 主分类号： | G01N33/68 | 分类号： | G01N33/68;G01N30/02;G01N1/38;G06F19/00 |
| 代理公司： | 昆明正原专利代理有限责任公司 | 代理人： | 刘明哲 |
| 地址： | 650106云南省昆明市*** | 国省代码： | 云南;53 |
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| 摘要： | 本发明一种细菌荚膜多糖蛋白结合物中游离蛋白含量的测定方法，属于生物技术领域。其内容为先以Lowry法测定出待检细菌荚膜多糖蛋白结合物中的载体蛋白浓度，然后取该待检结合物对应的载体蛋白作为样1、该待检结合物为样2，用高效凝胶过滤色谱法分别测定样1、样2的色谱图，利用外标法计算游离蛋白含量。本发明能准确、快速测定出细菌荚膜多糖－蛋白结合物中游离蛋白的含量，从而评价制品质量。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 细菌 荚膜 多糖 蛋白 结合 游离 含量 测定 方法 | ||
【主权项】：
1、一种细菌荚膜多糖蛋白结合物中游离蛋白含量的测定方法，其步骤是：(1)利用Lowry法测定待检细菌荚膜多糖蛋白结合物中的总载体蛋白浓度，为C0；(2)取待检细菌荚膜多糖蛋白结合物对应的载体蛋白溶液，根据其蛋白浓度，用生理盐水稀释到50～1000μg/ml作为样1，其最终浓度为C1；(3)取待检细菌荚膜多糖蛋白结合物，作为样2；(4)样1、样2分别上样于用生理盐水充分平衡的高效凝胶色谱柱，上样体积20～200μl，洗脱流速0.3～1.0ml/min，于波长214nm记录色谱图；载体蛋白洗脱峰峰顶对应时间为t1、峰结束对应时间为t2；(5)对样1色谱图进行积分，调节积分窗口为从峰顶对应时间t1到峰结束对应时间t2 的后半峰，得到样1的后半峰积分面积为S1；(6)对样2色谱图进行积分，调节积分窗口为从峰顶对应时间t1到峰结束对应时间t2 的后半峰，得到样2对应游离蛋白的后半峰积分面积为S2；(7)根据公式：C2＝(S2÷S1)×C1计算样2中游离蛋白的浓度；(8)根据公式：F＝(C2÷C0)×100％计算样2中游离蛋白的百分含量。
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