[发明专利]对虾白斑杆状病毒基因组DNA提取方法

摘要

本发明公开了一种对虾白斑杆状病毒基因组DNA提取方法。它以患对虾白斑杆状病毒病的存活的患病虾或新鲜的病死虾为样品，先用无菌水清洗后，再置样品于加热器皿中，加无菌水浸没至2～3cm，加热至沸腾，保持8～10min，加入TN缓冲液研磨制成匀浆液，经中速离心等步骤的处理，得到WSSV基因组DNA。本发明由于采用了加温煮沸法预处理样品的方法，使样品研磨容易，匀浆迅速而充分；还因为样品加热后，动物蛋白包括病毒蛋白凝固变性，病毒粒子核衣壳易于分离出组织，DNA得率大幅度提高；同时，对于苗种等病虾的早期检测，还可以采用全虾，方便了样品的获取。本发明为提取WSSV基因组DNA提供了快捷、简便、有效的途径。

主权项

1.一种对虾白斑杆状病毒基因组DNA提取方法，其特征在于提取步骤如下：1)以患对虾白斑杆状病毒病的病虾体为样品先用无菌水清洗；2)置样品于加热器皿中，加无菌水浸没至2～3cm，加热至沸腾，保持8～10min；3)称取经上述步骤处理后的样品1～10g，加入重量比为8～12倍的TN缓冲液研磨制成匀浆液；4)将上述匀浆液在4℃条件下经8000～12000×g离心处理后，取上清，加入：蛋白酶K至终浓度为100ug/ml、氯化钾至终浓度为50mmol/L、pH8.3～8.5的三羟甲基氨基甲烷盐酸盐至终浓度为10mmol/L、明胶至终浓度为0.1mg/ml、壬基酚聚氧乙烯醚至终浓度为0.45％、吐温-20至终浓度为0.45％，再加水定容至2倍体积，混匀后于沸水中煮沸12～15min，在4℃条件下经12000～13000×g离心处理10～12min，取上清；5)向上清加入等体积的氯仿、异戊醇混合液，其中，氯仿∶异戊醇＝24∶1，混匀，在4℃条件下经12000～13000×g离心处理10～12min后，取上清；6)向所得上清液中加入1/10体积的pH5.2的NaAc溶液至终浓度为3mol/L，加入2倍体积无水乙醇，充分混匀，于-20℃条件下沉淀20～60min；7)再在4℃条件下经12000～13000×g离心处理10～12min，弃上清，取沉淀，用70％冷乙醇清洗，去除洗涤液后得到对虾白斑杆状病毒基因组DNA。