[发明专利]二硫桥连双链形式的蛋白质的重组表达

摘要

本发明涉及以双链形式产生多肽或蛋白质的方法，该方法通过在大肠杆菌中的重组表达，由此i)所述多肽或蛋白质作为双链多肽或蛋白质发挥其功能，ii)第一链的C末端氨基酸基团是Arg或Lys基团，iii)所述蛋白质/多肽的第二链在其N末端具有1－20个氨基酸基团和称为PRS的五肽序列VPXGS，其中X可以是任何天然存在的氨基酸，其中V代表Val、Leu、Ile、Ala、Phe、Pro或Gly，P代表Pro、Leu、Ile、Ala、Phe、Val或Gly，G代表Gly、Leu、Ile、Ala、Pro、Phe或Val，而S代表Ser、Tyr、Trp或Thr；以及iv)所述方法包含以下步骤：a)在核酸水平修饰所述多肽或蛋白质，使经修饰形式的该多肽或蛋白质在其环区域包含序列VPXGS，其中X、V、P、G和S如上所定义；b)引入所述在核酸水平修饰的构建体到大肠杆菌细胞中；c)培养并且随后裂解所述宿主细胞；以及d)分离双链多肽或蛋白质。根据本发明的优选实施方案，所述多肽或蛋白质是肉毒杆菌神经毒素，特别是肉毒杆菌神经毒素(BoNT(A))A型。

主权项

1.通过在大肠杆菌宿主细胞中重组表达产生双链形式的多肽或蛋白质的方法，所述两条链是二硫桥连的，其中(i)所述多肽或蛋白质作为双链二硫键桥连的多肽或蛋白质发挥其生物活性；(ii)第一链的C末端氨基酸残基是Arg残基或Lys残基，(iii)所述蛋白质/多肽的第二链在N末端具有1-20个氨基酸残基和称为PRS的五肽序列VPXGS，其中X是任何天然存在的氨基酸，其中V是Val、Leu、Ile、Ala、Phe、Pro或Gly，其中P是Pro、Leu、Ile、Ala、Phe、Val或Gly，其中G是Gly、Leu、Ile、Ala、Pro、Phe或Val，并且其中S是Ser、Tyr、Trp或Thr；并且(iv)所述方法包含以下步骤：(a)在核酸水平修饰多肽或蛋白质，使得经修饰形式的该多肽或蛋白质在其环区域具有序列VPXGS，其中X、V、P、G和S如上所定义；(b)将核酸水平被修饰的构建体导入到大肠杆菌细胞中；(c)培养并随后裂解宿主细胞；和(d)分离所述双链二硫桥连的肽或蛋白质。