[发明专利]制备κ-角叉菜聚糖酶的方法

摘要

从腐烂的海藻分离到的嗜盐海洋革兰氏阴性细菌能够水解κ-角叉菜聚糖。为了以成本合算的方式最大化κ-角叉菜聚糖酶的生产，通过统计学优化方法确定了具有最少组分和它们的最适浓度的新培养基。因此开发出了新的培养基组合物，用于通过新的耐盐海洋细菌假单胞菌提高κ-角叉菜聚糖酶的生产。

主权项

1. 用于制备κ-角叉菜聚糖酶的方法，其中所述方法包括下列步骤：(i)将登记号为MTCC 5261的耐盐海洋细菌假单胞菌(Pseudomonas sp.)在15-50℃培养于液体培养基中16-72小时以获得培养物，所述培养基含有角叉菜聚糖、酵母提取物、氯化钠、K2HPO4和KH2PO4，比例范围分别为0.1:1.0:50:1:0.5到3.0:1.0:15.0:0.5:.05；(ii)将从步骤(i)获得的培养物在5000-8000rpm离心20-40分钟，获得作为上清液的无细胞提取液；(iii)从步骤(ii)获得的上清液中纯化粗酶，是通过用硫酸铵在3-15℃的温度下处理上清液，将混合物老化12-36小时的一段时间，然后在3-15℃下以5000-8000rpm离心，得到含有κ-角叉菜聚糖酶的沉淀；(iv)将从步骤(iii)获得的沉淀悬浮在Tris-HCl缓冲溶液中；和(v)将在步骤(iv)中获得的悬浮液透析以除去附着的硫酸铵，然后通过凝胶过滤得到所需的纯化κ-角叉菜聚糖酶。