[发明专利]植物单花粉高通量收集与PCR检测方法

摘要

本发明公开一种植物单花粉高通量收集与PCR检测方法，包括步骤为：显微镜分离花粉以及花粉破囊壁和染色；分装碱性裂解液于PCR板中，密封并离心使裂解液沉于管底；显微镜下用特殊镊子挑选着色单花粉粒并放入PCR管裂解液中；分装矿物油于PCR板中，短暂离心；置于PCR仪上90－98℃温度下裂解；在各管中加入TE缓冲液中和，离心，加入PCR反应成分；短暂离心，置于PCR仪上，反应参数为：90－98℃保持3－8分钟，热循环依不同反应而定，循环数为35－40，最后72℃延伸5－10分钟，保持于4℃下；PCR产物用电泳分离并在成像系统上进行扫描拍照。本发明具有效率高等优点，特别适用于生殖遗传统计分析。

主权项

1、一种植物单花粉高通量收集与PCR检测方法，依序包括如下步骤：1)显微镜分离完整、干净的未开裂花粉以及花粉破囊壁和染色，将染色液小心排净；留下的花粉粒清洗，最后让花粉粒完全干燥；2)用取液器分装适宜μl裂解液于适宜个数孔的PCR板中，密封并离心使裂解液沉于管底；3)在显微镜下用镊子挑选着色的单花粉粒并把着色的单花粉粒放入PCR管底的裂解液中；4)分装适宜μl矿物油于适宜个数孔的PCR板中，短暂离心；5)把步骤4)的适宜个数孔的PCR板于PCR仪上在90-98℃温度下保持16分-18分30秒；6)在步骤5)的每一管中加入适宜μl的TE缓冲液中和，离心，然后加入PCR反应成分混合液，调整终体积为20μl；7)短暂离心，置于PCR仪上，PCR反应参数为：90-98℃保持3-8分钟进行预变性，热循环的循环数设定为35-40，最后72℃延伸5-10分钟，获得PCR产物，保持于4℃温度下；8)步骤7)的PCR产物用电泳分离并在成像系统上进行扫描拍照。